1、無毒和無菌是體外培養細胞的首要條件。為保證細胞能在體外環境中生長繁殖,必須要確保無菌工作區域。
2、合適的溫度: -般哺乳類與禽類細胞在體外培養的適宜溫度是37°C ,不適宜的環境溫度會影響細胞的生長。
3、適宜的滲透壓:高滲溶液或低滲溶液會引起細胞發生褶皺、腫脹、破裂。
①CO2濃度精確控制
②溫度精準控制
③滿足細胞培養的濕度要求
水是細胞的重要組成部分,在培養箱中對細胞進行培養過程里，制冷或者制熱最直接的影響是細胞的培養基快速蒸發失水，蒸發將導致培養基上的滲透作用增強,產生滲透性脫水；培養基中鹽濃度增加,細胞中水分跑出細胞外細胞收縮,新陳代謝變緩,細胞死亡。
培養箱內相對濕度的控制室非常重要的,飽和濕度環境可以避兔培養液中二氧化碳逃逸,保持pH值穩定,也能防止由于干燥使培養液中水分蒸發,滲透壓升高,導致細胞培養失敗。大多數的二氧化碳培養箱是通過增濕盤的蒸發作用產生濕氣的,大型的二氧化碳培養箱是用蒸汽發生器或噴霧器來控制相對濕度水平的。--些培養箱在底部設置濕度蓄水池,這樣可以增強蒸發作用，但是,這個系統也更復雜,由于復雜結構的增加一些難以預料的問題也會在使用過程中出現。
④有效控制污染物
體外培養的細胞缺乏抗感染能力,所以防止污染是決定培養成功與否的首要條件，因而需要操作過程中盡可能地保證無菌。二氧化碳培養箱可應用不同的裝置去減少和防止污染的發生,讓用戶具有多重滅菌選擇。