◇水解乳蛋白
水解乳蛋白為淡黃色粉末，雖易潮解結塊，但不影響使用。
不同批號和牌號質量有差異。水解乳蛋白是乳白蛋白經蛋白酶和肽酶水解后的產物，含有豐富的氨基酸。開始時它是專為猴腎細胞培養設計的，而實際上它對許多細胞系(株)，如Hela細胞和原代細胞都是一種優良培養基。使用時用Hanks液配制成0．5％溶液(酸性)，一般與合成培養基按1：1比例混合使用。
◇鼠尾膠原
膠原是細胞生長的良好基質，它能促進組織和細胞的附著，改善生長表面特性。膠原來源有大鼠尾腱、豚鼠真皮、牛的真皮和牛眼的水晶體等，實驗室常用大鼠尾制膠原。鼠尾膠原為粘度較大的半透明液體，難以濾過除菌，應無菌操作制備膠原。
鼠尾膠原的制備方法
①0．1％醋酸溶液，10磅10分鐘高壓滅菌備用。
②250克體重大白鼠尾一條，置75％酒精中浸泡1小時。
③鼠尾置平皿中切成1．5厘米左右的小段，剝去毛皮，抽出尾腱。
④剪碎尾腱浸泡在150毫升醋酸液中，置于4℃冰箱內，間斷振搖48小時。
⑤4000轉/分離心30分鐘(最好在4℃條件)。
⑥上清液分裝小瓶，－20℃保存。
⑦殘渣可再加40毫升醋酸液作用24小時后，離心收集保存。
鼠尾膠原使用方法
①將鼠尾膠原均勻涂于器皿的細胞生長面，膠原量以不留液滴為度。
②培養瓶用沾有氨水的消毒棉球封口后置滅菌飯盒內。
③室溫2小時，氨氣與鼠尾膠原作用，膠原凝固。
④用BSS液或基礎營養液洗滌膠原面后，再經細胞培養液浸泡過夜，37℃干燥備用。
◇胚胎浸液
胚胎浸液能促進細胞生長繁殖。常用雞胚和牛胚浸液。將9—11天胎齡的雞胚磨碎，加等量緩沖液，離心收集上清液，即為雞胚浸液，于－20℃—－70℃保存。
合成培養基是根據細胞生存所需物質的種類和數量，用人工方法模擬合成的。目前已設計出許多種培養基，如TC199、MEM、RPMI-1640、DMEM、Ham'sF12等。這些培養基設計時各有其特定的目的，但實際上適用于多種細胞的培養。合成培養基主要成分是氨基酸、 維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質。
◇合成培養基的主要成分
氨基酸
氨基酸是組成蛋白質的基本單位。不同種類細胞對氨基酸需求不同，體外培養的細胞必須依賴培養液供給12種必需L型氨基酸(精氨酸、組氨酸、半胱氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸和賴氨酸)。此外，用于培養上皮細胞、內皮細胞、神經細胞等的培養液中還需補加谷氨酰胺。這是因為谷氨酰胺除了作為氮源、碳源外，還能促進各種氨基酸進入細胞，它所含的氮既是核酸中嘌呤和嘧啶的來源，也是合成三、二和一磷酸腺苷的所需物質。實驗又證實，谷氨酰胺在培養液中不穩定，加有谷氨酰胺的培養液，半衰期在4℃時為3周，在36．5℃時為1周，因此使用兩周以上的培養液還需補加原量的谷氨酰胺。
碳水化合物
碳水化合物既是細胞的能量來源，也是合成某些氨基酸的原料，主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸鈉等。
無機離子
無機離子是細胞的重要成分，它們在調節細胞代謝、促進細胞生長發育和維持細胞生理功能等方面有重要作用。
它們還是某些維生素、激素、酶形成過程中不可缺少的原料。培養液中除平衡鹽溶液所含無機離子外，有的還含有如Fe2＋、Ze2＋、Cu2＋等離子。
維生素
維生素是維持細胞生長的一種有機化合物，它分為脂溶性維生素和水溶性維生素兩大類。脂溶性維生素有維生素A、D、E、K等；水溶性維生素有維生素C和維生素B1、B2、B6、B12等。
其它成分
較為復雜的培養液中還包括核酸降解物如嘌呤、嘧啶、輔酶A以及氧化還原劑如抗壞血酸、谷胱甘肽等等。
◇合成培養基(液)的配制方法
人工合成培養基是細胞培養基的基礎培養液，稱為基礎培養基，因它提供細胞生存所需的營養成分，還稱為細胞營養液。人工合成培養基有干粉型、1倍工作液型和10倍濃縮型。常用的干粉型培養基性質穩定，便于儲存和運輸，使用方便。使用時按照說明書要求配制，要確保營養液所有組分完全溶解，并在消毒和保存過程中不產生沉淀。
RPMI-1640基礎培養液
甲液：RPMI-1640 10．4克
Hepes 2．7～5．4克
三蒸水 700毫升
磁力攪拌至顆粒完全溶解(3～4小時，橙黃色)
乙液：NaHCO3 2．0—2．2克
三蒸水 30毫升
37℃，30分鐘顆粒溶解
將甲、乙兩液混合，加水至終體積1000毫升，在4℃靜止2～3小時。濾過除菌，分裝，抽樣做無菌試驗，－20℃凍存。
RPMI—1640血清細胞培養液
RPMI-1640基礎營養液 80毫升
滅活小牛血清 20毫升
青霉素、鏈霉素 各100單位/毫升
pH 7．1—7．2
◇配制合成培養基(液)注意事項
①用三天內制備的玻璃三蒸水配制培養液。
②按二周用量配制為宜，配量過多，存放時間過長會造成培養基老化、變質、產生沉淀。
③培養液中各成分是否完全溶解的判斷方法：將培養液置室溫或4℃冰箱30分鐘后，觀察瓶底有無顆粒產生。
④根據實驗需要，在培養液中加入適量37℃單獨溶解的NaHCO3溶液。正常體細胞培養液中NaCO3量為2．0—2．2克/升，腫瘤細胞為1．5—1．7克/升。
⑤干粉培養基不易溶于水，若用CO2加壓濾過或CO2沖擊助溶方法，因CO2用量不易掌握，常出現CO2用量過多使營養液pH值明顯降低的情況，若再用NaHCO3調節pH值時，因NaHCO3的用量也難以掌握，常造成Na＋濃度過高，從而影響細胞的生長繁殖。本實驗室采用空氣CO2助溶法，即將甲液在磁場上攪拌3—4小時，當甲液pH值下降到5．8左右時(橙黃色)，氨基酸和維生素基本溶解。在甲液內再加入溶解有NaHCO3的乙液，兩液混和后，營養液pH值為7．0—7．1。抽濾后pH值上升0．1。此法操作簡便，營養液pH值穩定。
人工合成培養基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養基，常用的是血清、谷氨酰胺等。另外，為防止污染，培養液中還要添加一定量的抗菌素。基礎培養基加血清、谷氨酰胺、抗菌素等物質后，叫細胞培養基，也叫完全培養基。細胞培養基按血清含量多少又分為兩種，即細胞生長培養基和細胞維持培養基。
血清中究竟哪些成分是細胞生長所必需的呢?幾十年來沒有明確答案。還有一些細胞在血清培養基中不能生長。另外，由于血清成分復雜，常常給細胞培養后的研究工作，如細胞產物的提取、激素和藥物作用機理的研究帶來困難。1975年，Sato成功地用無血清培養基培養了垂體細胞株CH4，還有人用HamF12無血清細胞培養基成功地克隆了CHO細胞。近20多年來已報道了幾十種細胞系(株)在無血清細胞培養基中成功地生長和增殖，這些細胞有內分泌細胞、表皮細胞、神經細胞、淋巴細胞、成纖維細胞和腎細胞等。無血清細胞培養基的使用保證了實驗結果的準確性、可重復性和穩定性，減少細胞污染，簡化了提純和鑒定 McAb、淋巴因子、干擾素等細胞產物的程序，降低疫苗反應。
無血清培養基一般由基礎培養基和替代血清的補充成分組成。
◇基礎培養基
必須根據不同的培養細胞選用合適的基礎培養基。常用的基礎培養基有MEM、NT、M199、F12、DMEM、RPMI—1640、IMDM、DMEM：F12＝1：1、RPMI—1640：DMEM：F12=2：1：1等，其中DMEM和F12混合培養液為多種細胞使用，根據不同細胞的要求，每升中補加Hepes 15毫摩爾，NaHCO31．2—2．4克。
◇無血清培養基的補充成分
補充成分即代替血清的各種因子的總稱。多數無血清培養液必須補加3～8種因子，任何單一因子不能取代血清，至少需兩種。已知有100多種此類因子，其中有些是必需補充因子，如胰島素、硒酸鈉(Na2SeO3)和轉鐵蛋白，其它多數為輔助作用因子。補充成分按功能將其分成四類。
激素和生長因子
很多細胞用無血清培養時需加入激素，如胰島素(Ins)、生長激素、胰高血糖素等。此外，甾體激素如孕酮、氫化可的松、雌二醇等也是無血清細胞培養時常用的補充因子。幾乎所有的細胞系都需要Ins，它是一種多肽，能與細胞亡的Ins受體結合形成復合物，調節和控制細胞內多種代謝途徑，加強糖原、蛋白質、甘油三酯和DNA的合成。其原因可能是Ins中混雜某些刺激細胞生長的物質和重要的微量元素，但也有細胞不加胰島素也能生長。前列腺素E1和E2能刺激細胞生長，增加細胞環磷腺苷的水平。有些激素能調節細胞內某種生化反應，如腐胺能促進細胞(B104)快速分裂，是因為激素能增加細胞內腐胺的合成或促進腐胺轉入細胞內。生長因子是維持細胞生存和增殖所必需的物質，依照化學性質可分為多肽生長因子和甾體生長因子。多肽生長因子相對分子質量在10000左右，目前已鑒定的有數十種，其中半數以上是近幾年發現和鑒定的。脊椎動物至少有30種細胞類型(神經、肝、腎、支氣管等)，每種細胞至少有2—3種生長因子對其正常生存和增殖起著調節作用，因此估計機體中約有100多種生長因子。按結構和功能可分為表皮生長因子(EGF)、神經生長因子(NGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)等。生長因子是有效的促有絲分裂原，能縮短細胞倍增時間。
結合蛋白
結合蛋白有兩種，一種是轉鐵蛋白(TF)，它能增強細胞攝取和利用培養液中鐵的能力，還可結合毒性金屬離子，不同細胞需要量不同。有人認為TF中混雜有激素，也足以刺激細胞生長。白蛋白是另一種結合蛋白，它與脂類、金屬離子、激素等結合后，具有刺激細胞增殖作用。
貼壁因子
絕大多數真核細胞在體外生長時需要固著于適當的基底，幫助細胞固著貼附的物質叫貼壁因子或胞外基質。體外培養細胞常于粘著斑(adhension plaque)或其近旁發現纖維粘連蛋白(fibronectin，FN)，此處質膜下正是紐帶蛋白(vinculin)及α－輔助肌動蛋白(α-actin)存在部位。肌動蛋白絲借助這兩種蛋白質附著于質膜的內表面。FN又與非膠原糖蛋白相連。膜上FN受體將細胞外基質FN與細胞內肌動蛋白絲相連。這樣，胞外基質、細胞膜受體及細胞內某些分子直接或間接作用，共同形成細胞結構和功能的統一體，成為控制細胞形態、功能、生長、分化以及某些其它性質(如影響質膜中蛋白質的組織等)的重要因素之一。如體外培養的神經元存活及分化主要決定于所提供的細胞外基質；肌細胞分化，肝細胞和乳腺細胞的形態、代謝，腫瘤細胞的轉移過程，都與細胞外基質有關。
常用貼壁因子儲存液的配制方法：
纖維連結素 以1摩爾/升的尿素PBS液配制成1毫克/毫升的母液，－20℃保存。
多聚賴氨酸(poly-D-lysine)相對分子質量300000，貯存濃度為1毫克/毫升(用D-Hanks液或PBS液配制)。4℃冰箱保存，不能凍存。
膠原(collagens) 貯存濃度為1—3毫克/毫升，溶解在PBS液或0．1摩爾/升的鹽酸或0．1摩爾/升的醋酸液中。