(4)細胞分布不均及解決辦法
問：我的細胞接種培養板，細胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊？我看園子里有的戰友的細胞卻是聚集在中間，是不是板子的質量問題啊？
答：請問你的細胞是如何混勻的？是滴管吹打還是振蕩培養板？如果是后者，而且是轉圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導致細胞中間少，四周多！自己可是試試！
周邊一般是相對會多一點，但是中間的數量也不會很少啊~~ 鋪板的時候我也沒有特異去振蕩培養板。
大概是板子的質量問題吧或者是不是鋪板時候的細胞密度太低了？我用的corning的板 。
一個好辦法：在你培養種板之前，把培養板放入培養箱里進行幾個小時的飽和后再取出，種入細胞時力量要輕，可采取用滴頭在培養板孔的側面慢慢加入讓細胞懸液流入板孔中，培養的細胞基本是均勻生長。記住千萬不要用振蕩器振蕩，否則你的細胞就會想你說得那樣聚積在一起。
我今天把培養板放入培養箱里幾個小時，適當的把細胞密度加大了一下，另外多加了一點培養液，今晚看細胞鋪的挺好的。我認為有兩種可能解決你問題的辦法:1.加入前吹打均勻;2.從多孔板側邊或底邊緩慢加入。
問：我在做原代培養時也遇到過這種情況，我一直以為培養皿鋪膠不均勻會導致這種現象，因為混勻的血管段加入到培養皿中時，在相差顯微鏡下血管段均勻分布在培養皿中，24h后貼壁的血管段就是周邊多，中間相對少些。下次我要試試hkqu戰友的方法看能否改變這種現象。
答：這種現象很正常呀，不知你仔細觀察過沒有，孔直徑愈小，這個現象越明顯，我試過，24、96孔板這種現象不可避免，因為液體的附壁使得孔內培養液不是成一個液平面，而是周邊高，就像凹鏡一樣，而使用這兩種孔板由于需要加干預等原因而不能加足量培養液，使得細胞隨培養液一起出現“邊集”現象，如果為了使孔中央也有均勻細胞而增加接種細胞數量的話，這要看你需要觀察何種指標，如果是MTT
，免疫組化的話會因為細胞成層而影響結果。
(5)6孔板接種和換液問題：
問：我的細胞傳代很正常，但一種到六孔板里（不管加藥和對照），總有兩三個孔（隨機）細胞長得不好，很小，像破碎了。有人遇到過這種情況嗎？到底是啥原因呢？請各位指點
答：可能跟你加液的溫度有關。如果你細胞剛剛拿出來換液加液，培養基也是從4度冰箱拿出來不久，很容易細胞就會凍死了。建議你最好把培養基先在培養箱里邊孵育15min先。
另外，跟你細胞的生長狀態也有關。加藥之前的細胞可以用高點的血清濃度培養。保證細胞狀態良好。
或者放在37度水浴鍋里孵育也可以，或者是培養板本身的問題，你再換換其它培養板試試看。再有可能就是細胞狀態問題了，種板時的血清濃度調高試一下
問：最近幾天，我用六孔培養板接種細胞，培養24小時后更換培養基，在更換培養基之前，顯微鏡觀察到細胞貼壁，狀態非常的好，更換了培養基后，立即用顯微鏡觀察，發現每個孔中都近乎有一半的細胞表現出近乎死亡的狀態。細胞變得非常小，產生大量的碎片，而另一半的細胞一切正常，異常細胞與正常細胞之間存在一條分水嶺，上半個圓是好的，下半個圓就不好，這是怎么一回事？
答：你可以看一下是不是培養板沒放水平。有一回我也出現過這種情況。
你的培養液如何，如果培養液過期，細胞就不會貼壁。換一點新配制的培養液試一試。
我也經常碰到，我想可能是板的問題，換一個牌子的板或換用培養瓶就沒問題了。
不知樓主所需換液的培養板多不多，換培養基的時候如果沒有注意風機的影響，特別是所需換液的培養板很多時，容易使細胞因風吹失水而干縮破裂。如果如此，換液時應該逐個培養板進行，別怕浪費吸管，注意操作的效率！
(6)24孔板接種問題：
問：把細胞消化接種到24孔板之后，已經四天了，老是每孔的中間部分長不滿，每天換液時都用PBS 清洗，第二天換液時都出現同樣的情況，每孔的邊緣長的很好，中央大量死細胞？
答：我是選擇孔內鋪蓋玻片，在玻片上種植。每次換液都用PBS洗，必要的步驟嗎？另外，也有可能和細胞種類有關或者和培養液有關？
我想你的培養液可能加的太少了。由于表面張力的作用，培養板的邊緣液體會向上走，造成培養液面呈現一個凹面（就像量筒的液體凹面一樣），中央的細胞正好在凹面的最低處，培養液少，細胞的營養不夠，甚至干涸掉，空氣中的氧氣也會造成損傷，即使有增值過來的細胞也會死掉。
另外，檢查一下培養箱底部的水是否少了，如果少了，箱內的空氣濕度不夠，會造成培養液揮發加快，這樣即使剛加的液體不少，過一段時間，由于蒸發，液體量會減少，造成中央干涸。并且這樣會改變了培養液的成分濃度，造成滲透壓過高。
個人經驗認為這是物理問題:24孔板小，細胞接種進去后是很難搖均勻的，結果導致細胞重貼壁后呈現四周密中間稀的狀況.至于中間較多死細胞，如果是懸浮狀的話，也一樣是物理問題。接種后比較粗暴的碰撞，似乎對搖均勻細胞有一定效果.
在為多孔板培養的細胞換液時一定要注意，不要把培養基吸得太干，如果完全吸取，很容易造成細胞干涸，這樣的話細胞會很快死亡。我有一段時間總是遇到這個問題，一個板子中總有一兩個孔出現細胞大量死亡，后來發現是上面的原因。現在我做的時候如果必須把液體吸干，我會一個一個空來吸取，最多一次不超過3孔，然后馬上加入液體，同時在作轉染時，我會在吸液和加液時將風機關掉，這樣基本上會避免細胞死亡。
同時你所說的細胞周圍密而中間稀疏，大約有如下原因：
1.培養液加得太少。主要是由于液體張力的問題。
2.細胞接種后震蕩太厲害了。由于離心力作用導致細胞分布到周圍。
細胞分布均勻與否有一點很關鍵，即每種細胞是有個體差異的，別人的細胞操作不一定適合于你.所以要靠自己摸索，且找出專屬于自己細胞的一套規律，有如下經驗：
1.所有待接種的細胞懸液在種板前一定要用吸管混勻。
2.按資料記載，24孔板的液體量為1ml，個人也覺得1ml的量足矣。
3.接種時，要慢慢加樣，且記得輕微旋轉槍頭，這樣做對細胞均勻分布有一定效果。
4.接種后最好直接放入培養箱讓細胞適應培養板這個新的環境，個人認為沒有必要在室溫放置一段時間。
5.根據細胞的特性，細胞均喜歡聚集在邊緣生長，所以我考慮到，你的問題還有可能是接種時的細胞密度不夠，導致周邊密集，中間稀疏的錯覺。你的拌種密度是多少？
另"要慢慢加樣，且記得輕微旋轉槍頭"的意思就是:加樣不能太快，避免細胞在一個加樣處聚集，且注意在不同的部位進行加樣，即邊加邊活動槍頭，人為使細胞趨于均勻分布，我個人覺得有一定的效果，不知這次我解釋清楚沒有。