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  • 發布時間:2019-04-26 20:29 原文鏈接: 細胞培養用液的配制與消毒3

    九 . 肝素溶液的配制: 
    含有肝素的培養液可以使內皮細胞純度提高,肝素加入全培養液中最終濃度為 50ug/ml 。因為現在市售的多為肝素鈉,包裝為約為 0.56 克 / 瓶,配制時,可將其溶于 100ml 三蒸水中,定容,過夜,然后過濾除菌,分裝小瓶,保存溫度為 ℃ 。使用時,向 100ml 培養液中加入 1ml (精確可加入 0.9ml )即可。


    十 . Ⅰ 型膠原酶: 
    0.1 % Ⅰ 型膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配制和消毒滅菌。注意:因為 Ⅰ 型膠原酶分子顆粒比胰酶大,不容易過濾,因此可以用蔡式濾器過濾除菌。分裝入 10ml 小瓶 -20℃ 保存。


    十一 . 明膠溶液: 
    因為明膠難于過濾,所以配制 0.1 %明膠溶液必須用無菌的 PBS 配制。所以制備過程中必須要注意無菌操作。首要的問題是如何無菌準確稱量 0.1 克 (配成 100ml 溶液) — 即解決無菌分裝藥品的問題。其次要注意即使是 01. 的溶液,明膠也難溶,因此要充分搖勻,過夜放置,然后無菌分裝入 50ml 小瓶中, 4℃ 保存。

    注意事項: 

    1. 配制溶液時必須用新鮮的蒸餾水。

    2. 安裝蔡式濾器時通常使用孔徑 0.45 微米 和 0.22 微米濾膜各一張,放置位置為 0.45 的位于 0.22 微米的濾膜上方,并且要特別注意濾膜光面朝上。 

    3. 配制 RPMI1640 培養基時因為還要加入小牛血清,而小牛血清略偏酸性,為了保證培養液 PH 值最終為 7.2 ,可在配制時調 PH 至 7.4 。


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