①將冷凍管從液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，細胞融化后要盡快(約1min)移出37℃水浴。37℃水浴時間延長會提高細胞死亡率，復蘇過程中一般細胞死亡率在20%～25%之間。
②迅速用酒精棉球擦拭冷凍管外部殺菌消毒，然后放置在冰浴上。
③小心開啟瓶蓋，把細胞轉入含有4mL培養基的培養瓶中，然后把培養瓶移至培養箱，36℃～38℃培養1h，讓細胞貼壁。
④細胞貼壁后，小心移棄培養基，主要是去掉DMSO(懸浮生長細胞要通過離心沉淀除去DMSO)、死細胞及其碎片，加5mL新鮮培養基，36℃～38℃培養。
⑤細胞培養24h后，更換新鮮培養基，繼續培養直到形成單層，便可以傳代。
⑥詳細記錄復蘇細胞的名稱、數量、復蘇時間、存放部位等。