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  • 發布時間:2019-04-03 22:09 原文鏈接: 細胞形態的觀察實驗——成纖維細胞微絲的染色

    實驗方法原理微絲普遍存在于多種細胞,對細胞的形狀和運動有一定作用。細胞松馳素B可與微絲的亞單位肌動蛋白結合,從而破壞微絲,改變細胞的形狀
    實驗材料

    成纖維細胞

    試劑、試劑盒

    PBSTriton X-100M-緩沖液戊二醛固定液考馬斯亮蘭染液細胞松馳素BDMEM

    儀器、耗材

    光學顯微鏡鑷子平皿載片吸水紙恒溫箱

    實驗步驟

    一、方法
     

    1.  在平皿中有三張成纖維細胞貼壁生長的蓋片,在超凈工作臺內將一張蓋片移入另一皿中繼續培養,用作對照。


    2.  在有兩片的平皿內加100 μg/ml 的細胞松弛素B 4滴繼續培養半小時。


    3.  將用細胞松弛素B處理過的兩張蓋片取一張做染色處理,另一張用培養液洗五次(在平皿內換五次培養液,每次都要搖動),繼續培養、觀察。兩小時后細胞形狀恢復,接近正常。


    4.  對恢復的蓋片與第一張沒用藥的蓋片一同做染色處理。


    5.  染色處理


    (1)將需染色的蓋片放入盛有PBS的平皿內用吸管輕輕吹洗蓋片,換液三次,每次3分鐘,洗去培養液。


    (2)將蓋片移入2%Triton  X-100液,置37℃恒溫箱內處理20~30分鐘,以提取骨架以外的蛋白質,使骨架圖像清晰。


    (3)立刻將蓋片移入M-緩沖液,換洗三次,每次3分鐘。M-緩沖液有穩定細胞骨架的作用。


    (4)將蓋片移入3%戊二醛固定15分鐘。


    (5)將蓋片移入0.2%考馬斯亮蘭染液中,染色15分鐘。然后小心地用自來水沖洗,空氣干燥。


    二、結果
     

    1.  光鏡觀察,微絲聚集成的張力纖維束被染成藍色。

    2.  在沒用藥的標本上,成纖維細胞多數有突起,微絲沿突起規則排列。

    3.  用細胞松馳素B處理的標本,由于微絲被破壞突起縮回,多數細胞形狀變圓。

    4.  用藥處理后又洗去藥的標本,由于解除了藥的作用,肌動蛋白重新聚臺形成微絲,細胞形狀恢復正常。

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