一、實驗內容
1、細胞電子顯微鏡檢測
2、細胞活率測定
3、亞細胞結構的分離與鑒定
二、實驗設計
前一天細胞傳代:
1. （電鏡）中午每班傳細胞入含小蓋片培養瓶3瓶
晚上1瓶正常、2瓶損傷
次日損傷2瓶中，其中1瓶損傷恢復
2. （活率）中午每組傳細胞入96孔培養板9孔
晚上3孔正常、6孔損傷加無糖培養液
次日損傷6孔中，其中3孔損傷恢復
3. （分離）每組傳代細胞（1傳2）25ml培養瓶2瓶
三、操作
（一）電鏡標本制備、送檢、觀察比對正常、損傷及損傷后恢復標本、照相、分析、總結
（二）細胞活率測定――MTT比色法
實驗步驟：
1、接種1.5×104/ml細胞于96孔板、每孔加200ul培養液 37℃、5%CO2、飽和濕度下培養；
2、測定前2h，每孔吸棄原培養液，加高糖培養液180ul 、再加 MTT溶液20ul，繼續培養；
3、到2h測定時，每孔吸棄培養液，加DMSO溶液150ul，振蕩1分鐘；
4、酶標儀492nm波長處比色。
結果觀察及要求：
1、活細胞被染成深藍色，而死細胞不被染色
2、記錄酶標儀上光吸收值，記錄結果
3、分析每組細胞生長情況
注意事項：
1、吸棄和添加培養液時要注意，盡量不要將細胞吹起;
2、每孔的細胞密度不能超出1x105 /ml ，避免影響實驗的區分度；
3、高濃度血清會導致實驗本底增高，比色前盡量使血清濃度不超過10%。
（三）亞細胞結構的分離與鑒定（細胞核的提取）
操作：
收集細胞（消化法）—— 離心(1000/min×5’ ) ——沉淀加0.075M KCl
4ml，吹打，靜置20min——離心(1500/min×10’ ) —— 取沉淀加蔗糖溶液4ml，打勻——離心（2500/min×10’）
——取沉淀加少量固定液涂片——酒精燈烤干——甲醇固定5 ’——Giemsa染色5
’——自來水沖洗——吸水紙吸干玻片（反面）——顯微鏡下觀察（鑒定）
結果：
細胞核染成深蘭色
注意事項
1、注意正確使用離心機（平衡、對稱）
2、正確使用顯微鏡
3、Gimsa工作液臨用前稀釋
（PBS：Gimsa原液9：1）