細胞感染方法

  細胞我們實驗室不可缺少的實驗產品之一，那么細胞感染是什么東西引起？有了細胞感染要注意那么方面？今天就為大家分析細胞感染的方法。

（一）細胞準備
將狀態良好的目的細胞接種到24孔板，使細胞濃度為 1×10⁵/ml 細胞，接種細胞數量因細胞的生長速度而略有不同， 一般是保證第二天進行病毒感染的時候細胞匯合率介于 50%至70%之間。
（二）病毒感染
1.感染細胞zui佳MOI 的測定MOI（Multiplicity of Infection，感染復數）是指每個細胞感染的病毒數，通常MOI 越高，病毒整合到染色體的數量以及目的蛋白的表達量越高。對于分裂活躍的細胞，比如 Hela、293 細胞，MOI=1～3 時，80%以上的細胞均表達目的基因。而對于非分裂細胞，比如原代細胞，感染效率較低。需要進行MOI梯度摸索實驗，選擇適合的MOI 進行實驗。
2.感染步驟
按實驗需要將細胞鋪板（比如12孔板）；細胞數以第2天密度約50%為宜；37℃ 培養過夜。
    對于Polybrene 可施加的細胞：準備完全培養基和 Polybrene混合物，Polybrene 終濃度為摸索得到的zui適終濃度。移去培養基并添加 0.5 ml Polybrene/培養基混合物于每孔中（適用于24 孔板，其他孔板請相應調整體）。
對于不適用 Polybrene 的細胞，以上步驟省略，直接進入下面步驟：
    感染前，從冰箱取出并在 37℃水浴中快速融化病毒，吸去細胞原有培養基，將病毒原液加入細胞中，輕輕8字混勻。感染后第二天（約12小時），吸去含病毒的培養液，換上新鮮的完全培養液，繼續37℃培養。感染后48小時，對于帶 GFP報告基因的病毒，可通過熒光顯微鏡觀測GFP表達效率，對于攜帶 Puromycin抗性基因的病毒，換上含適當濃度的 Puromycin 的新鮮完全培養液，篩選穩定轉導的細胞株。