細胞技術專題：人臍動脈平滑肌細胞培養實驗

實驗方法原理	運用消化法進行人臍動脈血管平滑肌細胞的培養，并用倒置顯微鏡進行形態學觀察和用免疫組化對培養細胞進行鑒定。
實驗材料	臍帶
試劑、試劑盒	膠原酶消化液胰蛋白酶膠原酶彈性蛋白酶 DMEM
儀器、耗材	眼科剪滴管離心機培養皿 CO2培養箱
實驗步驟	一、實驗步驟 1. 冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔細清除脂肪、包膜、血管等組織，轉入青霉素小瓶中，加入少量無菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0 mm³大小的碎片。 2. 用滴管輕輕吸出上層細小脂肪碎塊和油滴，再用無菌D-Hanks’液反復清洗8~10 次。 3. 加入 10 倍體積無菌膠原酶消化液(1 mg/mL)，室溫消化30 min，1000 rpm離心 5 min，棄上清，加1 mg/mL胰蛋白酶 37℃消化 20 min，再次離心5 min，棄上清。 4. 加入胰蛋白酶 37℃消化20 min，再次離心5 min，棄上清。 5. 加膠原酶(1 mg/mL)彈性蛋白酶(0.5 mg/mL) 混合消化液 37℃消化 20 min，再離心5 min，棄消化液。 6. 加混合消化液 37℃消化 20 min，再次離心 5 min，細胞加含 10% FBS的DMEM培養基重懸，轉入培養皿 37℃、5% CO₂培養箱中培養即可。