1. 融解從 1 g 組織或 5 瓶培養皿細胞制備、凍存于 NSB 中的細胞核。1000 g 離心 5 分鐘，去上清，用 200 μl HRB 輕輕吹打重懸。
2. 將懸液轉至一個帶有抗酚螺帽的硅化玻璃試管，37℃ 水浴 5 到 15 分鐘（由預實驗決定)。孵育過程中，偶爾輕輕攪動細胞核，避免沉于管底。
3. 加入 1.5 ml HSB 和 90 μl DNA 酶Ⅰ（終濃度 100 單位/ml）終止反應，37℃ 水浴 3~5 分鐘，同時劇烈吹打直至不再黏稠。
4. 依次加入 40 μl 0.5 mol/L EDTA，40 μl 25% SDS 與 20 mg/ml 蛋白酶 K，混勻，37℃ 水浴 30 分鐘。
5. 熱酸酚抽提除去蛋白質和大部分 DNA：加 2.5 ml 抽提緩沖液，然后加等量預熱到 65℃ 的由抽提緩沖液飽和的酚，于 65℃ 劇烈混合 10 分鐘。
6. 將試管置于冰上 5 分鐘，然后于 2000 g 離心 15 分鐘分離水相與有機相。吸去下層有機相，留下水相于界面。
7. 加等量新鮮飽和酚，如第 5 步再抽提一次。
8. 將水相吸出到一個新離心管，用等量氯仿抽提一次。將上層水相吸出到一個新離心管。
9. 加 100 μg 酵母 tRNA 載體與 2.5 倍體積冰冷的乙醇，于 -20℃ 放置 1 到 18 小時沉淀 RNA。
10. 10000 r/min 離心 10 分鐘，去上清，再用 1 ml TE 緩沖液重懸。
11. 如果 RNA 用作濾膜雜交的探針，最好做（也可不做）一步額外的清洗。
(1) 往第 10 步得到的 1 ml RNA 樣品中加 1 ml 冰冷的 10% TCA，冰浴 10 分鐘以沉淀 RNA。
(2) 合適的收集裝置（如微孔濾器），通過真空抽濾將沉淀收集于一張直徑 25 mm 的硝酸纖維素濾膜上，在濾器中用冰冷的乙醇清洗濾膜。
(3) 將濾膜放在一個硅化玻璃液閃計數管的底部，于 65℃ 分 2~3 次各用 1 ml 水沖洗，合并收集沖洗液。
(4) 乙醇沉淀濃縮 RNA ( 即加甲酸鈉至 0.2 moI/L，加二倍體枳乙醇，于 10000 r/min 離心 10 分鐘）或用真空離心蒸發干燥器濃縮 RNA。
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