原理
ChemoMetec A/S的NucleoCounter是內置的熒光顯微鏡設計,檢測與細胞核酸結合的熒光染料PI的信號。NucleoCounter分析的結果是總細胞濃度或死細胞濃度,取決于樣品的處理。
◇碘化丙啶
碘化丙啶(PI)是一種熒光分子和高選擇性DNA染料,PI可與雙鏈DNA(dsDNA)高效結合,一旦與DNA結合,激發和發射光波長轉換,與游離的 PI(沒有結合DNA)相比,熒光強度提高20-30倍(提高了信噪比),從而顯著提高測量精度。不同細胞(不同的細胞大小或細胞形態)的細胞核大小基本上是一致的,因而不需要校正。
◇碘化丙啶排斥法(PIE)
具有完整細胞膜的活細胞DNA實際上是不會被PI染上色,因而,活細胞在分析前需要破壞細胞膜;另一方面,死細胞的細胞膜可透過PI,因而死細胞不需要裂解就可以染上色。
3PI排斥法測定細胞活力
對懸浮細胞用碘化丙啶排斥法(PIE)和結合總細胞計數方法,可以算出死細胞和活細胞的比例。PIE方法分析細胞活力原理是基于分析的細胞膜對PI的滲透特性。