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  • 發布時間:2020-04-08 10:02 原文鏈接: 細胞消化的小技巧(二)

    細胞消化小技巧

    不一定要一次把所有細胞都要消化下來!

    晃動培養盤并在顯微鏡下用肉眼觀察,只要70~80%細胞都收縮了或超過適合消化時間,就該終止消化反應,如果細胞量夠即可進行后續傳代或實驗步驟;如果細胞量不夠,則可視情況用不含鈣、鎂離子的平衡鹽溶液清洗仍貼壁的細胞,再進行一次消化反應。

    ▲ 消化不下來的細胞(黃)請視情況決定是否再消化一次。

    不一定要吹打成完全單細胞懸液!

    一般細胞脫離培養底物、并經過5~10次輕柔吹打后,會在細胞懸液里形成小規模聚集(約5~10顆細胞),所以不需要過度延長消化時間想讓細胞完全分離成單細胞懸液。

    消化效果不佳,先提升消化液濃度、再加長作用時間!

    當你選定了一種消化方式 (物理機械法除外),發現效果不佳,首先應考慮提高EDTA或胰酶濃度,效果再不佳才加長消化的作用時間,避免細胞長時間浸泡在消化液中造成的細胞膜損傷。

    (一般消化液使用:0.02%~0.04% EDTA作用5-20分鐘;0.2~0.5% 胰蛋白酶作用1~5分鐘)
     

    結語

    細胞消化 ,是一個看似很簡單,但是有很多技術含量的步驟。消化好壞、是否污染、有無受傷,都在這短短的五六分鐘里決定。

    當我們已經可以順利操作細胞培養實驗,接下來要思考的,就是如何讓細胞長得更健康、更均一、做出來的實驗才會更完美。

    祝各位的細胞都顆顆透亮、粒粒分明、活力旺盛!

     


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