（三）用沉降速度法分離細胞：
利用重力沉降（1g），或低速速率－區帶密度梯度離心（＜1000×g）也可以純化各
種細胞。
下面舉一些分離實例來說明這種方法。主要方法取自參考文獻5，11，12，
用沉降速度法分離細胞舉例
細胞樣品 | 被分離細胞類型 | 梯度 | 離心時間 /RCF( × g) | 設備 | 結果 | 文 獻 | ||
純度 | 產率 | 活力 | ||||||
白血球 | 淋巴細胞（a） 單核細胞（b） | BSA(1.5~6.5%) | 9 分/20× g | 特制離心室 | a) ＞ 90％ b) ～ 90 ％ | a)90％ b)67％ | 99% | 5 |
白血球 | 淋巴細胞（a） 單核細胞（b） | Ficoll（2～4％） | 2 小時/1g | 重力沉 降室 | a) － b)69 ～ 77％ | a) － b) 28％ | ＞98 ％ | 12 |
白血球 | 淋巴細胞（a） 單核細胞（b） | Ficoll （ 3.4 ～ 16.9％） | 45 分/800 ×g | 低速區帶轉頭 | / | / | / | 12 |
預處理白血球 | 淋巴細胞（a） 嗜堿性細胞（b） | Ficoll（4.5～9.5 ％） | 15 分/85 ×g | 甩平轉頭100ml 離心管 | a) ＞ 95％ b)62 ～ 72％ | a) ＞ 90％ b)30 ～ 50％ | / | 11 |
人骨髓細胞 | CFU-C | Ficoll（2～4％） | 2h/1g | 重力沉降室 | / | / | / | / |
預處理的犬胃 細胞 | 壁細胞（a） 主細胞（b） | Ficoll（2～4％） | 50 分/1g | 重力沉 降室 | a) ＞ 60％ b) 85％ | a) ～ 50％ b) ～ 30％ | / | 12 |
竇狀肝細胞 | Kupffer（a） Endothelial（b） | Percoll (3.5~18%) | 8 分/16g | 特殊沉降室 | a) 98％ b) 97％ | a) 68％ b) 86％ | ＞95 ％ | 5 |
（四）細胞的離心浮選：
利用離心浮選法分離細胞最初是在1948 年由Lindahl 提出的，當時取名為“逆流離心” （文獻12）。這個設想在上世紀60 年代中期由Beckman 公司研發成為商用浮選轉頭和浮選離心系統，經過逐步改進發展成目前的JE－6B（5ml,3,470×g）及JE-5.0(40ML,4,700×g) 和Hitachi 的R5E（40ml，5,000rpm ）細胞浮選系統。現代的浮選分離可以用光學系統直接在TV 顯示屏上觀察離心浮選過程（透明錐形離心室）。
離心浮選法特點：
l 利用細胞懸浮在錐形離心室內受到的離心力，流體阻力和浮力的平衡關系實現不同
種類細胞的純化，純度很高。
l 不需要密度梯度；
l 適合分離純化直徑在5～50μm 的細胞；
l 收集細胞的數量可達107 ～1012 個（JE－5.0 或R5E）；
l 通過光學系統可以觀測浮選過程；
l 可以實現自動收集已純化的細胞；
l R5E在離心機門上有照相機，記錄浮選過程；
l 離心浮選室可以高溫消毒（121℃,20分）
離心浮選系統組成：
l Hitachi或Beckman高速冷凍離心機；
l 離心浮選轉頭（日立R5E或貝克曼JE-5.0）；
l 環氧樹脂透明離心室；
l 帶流量計、蠕動泵及加樣分配閥的加樣系統；
l 浮選轉頭專用觀察門蓋；
l 可以實現自動收集已純化的細胞；
l 光源組件（裝在轉頭下方）；
l TV顯示系統.
例6 肝主質細胞倍體級分離（文獻13）
l 所需設備同上述。
l 干細胞浮選用介質：L-glutamine(131mg/l),L-aspartic acid(13.3mg/l),
L-threonine(23.8mg/l), L-serine(31.5mg/l), glycine(37.6mg/l), L-alanine(53.5mg/l),
L-glutamic acid(132.4mg/l), KCL(223.7mg/l), NaH2PO4·H2O(96.6mg/l),MgCl2·6H2O
(101.7mg/l), NaHCO3(2.01g/l), glucose(3.60g/l), fructose(3.60g/l),
Sucrose(67.4mg/l).溶液調節到PH7.4，滲透壓：308mOsm，配置后儲存在－20℃待用。
l 肝主質細胞懸液，從三月齡雌性WAG/Rij 鼠取出；
l trypan 藍染色劑。
l 結果：各種倍體細胞分布
二倍體（2n） | 四倍體（4n） | 八倍體（8n） | 16 倍體（16n） | |||
單核 | 雙核 | 單核 | 雙核 | 單核 | 雙核 | / |
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