5.固定方法
(1)福爾馬林法：
在單細胞懸液中加入等體積含8％甲醛的鹽水G，4℃下固定12至18小時。該法常用于Acriflavine-Feulgen染色。
(2)乙醇法：
細胞被重新懸浮于5ml冷鹽水G中，慢慢加入-20℃95％的乙醇15ml，其最終濃度為70％，冰浴30分鐘。此法常用于EB及PI染色。
(3)丙酮法：
細胞懸浮于冷生理鹽水中，慢慢加入冷丙酮，使其最終濃度為85％。此法常用于病毒抗原的免疫熒光研究。
在流式細胞光度術中最常用的熒光染料有20余種。其中包括抗生素類的光神霉素和色霉素、Feulgen形試劑Acriflavine和核酸插入劑EB及PI(Ethidium Bromide，Propidium Iodide)。
(1)Aeriflavine－Feulgen染色法：
器材和試劑：4mol/LHCl；普通離心機；Acrmavine－Feulgen染色液；鹽酸—乙醇液。
步驟：①經福爾馬林固定的細胞低速度離心后棄上清；②用蒸餾水沖洗1次，然后以4當量鹽酸在室溫水解20分鐘；⑧離心后棄上清并以蒸餾水沖洗1次；④把細胞重新懸浮于Acriflavine—Feulgen染色液中，室溫靜置20分鐘；⑤離心棄染色液，并用鹽酸—乙醇液至少洗3次；⑥如做細胞體積測定或細胞分類可將樣品懸浮于蒸餾水中，如進行細胞周期分析則懸浮于生理鹽水中。
(2)EB及PI染色法：
器材和試劑：普通離心機；恒溫水浴箱；RNA酶溶液。
步驟：①經乙醇固定的樣品用RNA酶處理30分鐘，37℃水浴；②離心后棄RNA酶，用冷蒸餾水洗1次；⑧在冰浴中用EB或PI染色液染色20分鐘；④離心并棄染液，重新懸浮于蒸餾水或生理鹽水中。
為縮短染色時間并提高染色特異性，Krishan介紹了一種將細胞直接懸浮于PI的低滲液中的染色法，這樣可以破壞細胞膜直接染核染色質。用此方法得到的單細胞DNA組方圖與用常規方法得到的結果基本相同。方法如下：細胞經150g離心5分鐘；細胞直接懸浮于PI低滲液中，4℃5～10分鐘；直接進行FCM分析。
(3)DNA－蛋白質雙染色法：
對細胞進行多參數分析時，常對DNA－RNA或DNA－蛋白質進行雙染色。測量后可獲得一組細胞內蛋白質或RNA或DNA的含量，以及各種含量細胞數量之間的關系的三維組方圖。下面以DNA/蛋白質(PI/FITC)染色為例(Crissman et al．1976)。
器材和試劑：恒溫水浴箱；普通離心機；RNA酶溶液；FITC染液；PI染液。
步驟： ①經70％乙醇固定的L1210白血病細胞；②在37℃，用RNA酶液處理30分鐘；⑧離心后棄上清，并用蒸餾水洗1次；④先用FITC染液染30分鐘；⑤離心后用蒸餾水洗1次；⑥再用PI染液染20分鐘，冰浴；⑦蒸餾水洗1次并重新懸浮于生理鹽水中，⑧進行FCM分析。
(1)在樣品制備過程中要盡量減少離心次數，以避免產生細胞團塊和丟失細胞。
(2)要避免過長時間的固定并把細胞外的染料洗干凈，以減少熒光本底。
(3)勿用下列固定劑：冰醋酸—乙醇，它能引起大量細胞丟失；苦味酸，因其本身發熒光并很難從細胞里去掉汞化合物，因其在細胞內形成結晶。
(4)在進行雙染色時盡量選用激發光譜不接近的熒光染料。
(5)在進行細胞周期分析時，如CV值過大將導致非特異的胞漿染色。
(1)PBS溶液：NaCl 1800mg、KCl 200mg、Na2HPO4 1150mg、KH2PO4 200mg、蒸餾水1000ml。
(2)胰蛋白酶溶液：NaEDTA液4ml(貯存液：1gNaEDTA溶于100ml蒸餾水)，每個包裝胰蛋白酶(Difco)先加10mlPBS溶解，再加186mlPBS液，用前以0．2μm濾器過濾。
(3)Hank's平衡鹽水：NaCl、KCl 80g、40g、CaCl2 0.14g、MgCl2 0．10g、MgSO4 0．10g、Na2HPO4 0．06g、KH2PO4 0．06g、酚紅0．006g、葡萄糖1．00g、NaHCO3 0．35g，以上各成份依次溶于1L蒸餾水中，10～15磅消毒20分鐘，4℃冰箱保存。切勿搖動，以免出現碳酸鈣沉淀。
(4)分離液：EDTA 0．5mmol/L，每毫升生理鹽水-GM溶0．1mg胰蛋白酶。
(5)中和液：每毫升生理鹽水中含0．2mg大豆胰蛋白酶抑制劑、DNA酶10．01mg、BSA 1mg。
(6)磷酸緩沖液：0．05mol/L蔗糖、0．14mol/L NaCl、0．002mol/L Na2HPO4。以NaHCO3調節pH。
(7)TPB分離液：TPB(K and K Laboratories Inc)為1％水液，冰凍保存，用前以蔗糖—鹽溶液稀釋。
(8)生理鹽水-GM液：葡萄糖1．1g、NaCl 8g、KCl 0．4g、Na2HPO4·12H2O 0．39g、KH2PO40．15g依次溶于蒸餾水1000ml中。
(9)鹽水G：MgSO4·7H2O 1．5g、CaCl2·2H2O 0．16g依次溶于1000ml生理鹽水－GM中。
(10)Acriflavine—Feulgen染液：Acriflavine 0．2mg/ml偏重亞硫酸鉀5mg/ml。
(11)鹽酸—乙醇溶液：1ml濃鹽酸加99ml 70％乙醇。
(12)RNA酶液：RNA酶10mg(Sigma)、Na2HPO4·7H2O 55．6mg、NaH2PO4 168．9mg，溶于10ml蒸餾水。
(13)PI低滲液：PI0．05mg/ml，0．1％枸櫞酸鈉水溶液。
(14)FITC染液：FITC 0．05mg/ml的0．5mol/L NaHCO3溶液。
(15)PI染液：0．1mg/ml的PBS溶液。
(16)色霉素—A3染液：CA3 1Omg、MgCl2·6H2O 1．5g在4℃溶于500ml蒸餾水(CA3不能在溫水中溶解)。
(17)EB染液：1％的水溶液或1％的PBS液。
細胞顯微分光光度術(microspectrophotometry)是利用細胞內某些物質對特異光譜吸收的原理，用來測定這些物質如核酸與蛋白質等在每一個細胞內含量的一種實驗技術，如DNA對紫外線最高吸收波長是260 nm。也可經過特異的染色反應，如DNA經Feulgen染色反應后就可以吸收波長為546nm的可見光波段，與分光光度儀測定溶液成分的方法相比，這種技術不僅可以定位，而且可以靈敏地測出一個細胞內某種成分的含量。
細胞顯微分光光度測定法可分為紫外光顯微分光光度測定法與可見光顯微分光光度測定法。前者是利用細胞內某些物質對紫外光某波段特有的吸收曲線來測定相應物質的含量；后者則是根據某種物質特異的染色反應，然后再測定其對可見光某特定波段的吸收能力來進行對該物質的定量測定。