細胞自噬研究詳解（二）

4、自噬流檢測方法

細胞經自噬誘導或抑制后，需對自噬流的水平進行觀察和檢測，常用的技術手段見表1：

表1 自噬體計數及自噬流檢測方法匯總

（Mizushima et al, Cell, 2010）

其中，電鏡觀察法由于受到實驗條件和設備的限制應用范圍有限；而由于自噬過程發生快速，通過IB/WB檢測LC3-II水平和GFP-LC3的方法易受到實驗進行時長的影響。

想要準確檢測自噬流的變化，需要多種技術手段共同使用，才能達到理想的實驗效果，產生具有說服性的實驗結果。

自噬雙標產品 ：mCherry-GFP-LC3B腺病毒（Adenovirus）、慢病毒（Lentivirus）和腺相關病毒（AAV） 

mCherry-GFP-LC3B自噬雙標系統的工作原理為： 未發生自噬的細胞及含有自噬體的細胞中，由于mCherry與GFP共同表達，細胞呈現黃色熒光。當自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體后，酸性的溶酶體環境使酸敏感的GFP熒光淬滅，而mCherry不受影響，進而使自噬溶酶體呈現紅色熒光。因此，紅色熒光可指示自噬溶酶體形成的順利程度。紅色熒光越多，綠色熒光越少，則從自噬體到自噬溶酶體階段流通得越順暢。反之，自噬體和溶酶體融合被抑制，自噬溶酶體進程受阻（見圖4和附圖）。

Vigene現推出mCherry-GFP-LC3B腺病毒、慢病毒和腺相關病毒，滿足您實驗的不同需要。

·簡便直觀，實現自噬可視化； 

·準確指示，實現自噬流監測。