12孔板加100-200ul確實偏多,我為了減少上樣體積、增加上樣量,一般是先將細胞消化下來,然后一個50ml的培養瓶細胞沉淀加100-200ul的細胞裂解液,這樣提出的蛋白一般是5-10ug/ul。如果使用直接裂解法的話,12孔板應該可以只用50ul,或者更少,你可以試一下,只要裂解液能覆蓋所有細胞即可,再用槍頭小心吹打以促進裂解液與細胞充分接觸即可。但本人認為先消化收集細胞再裂解,對于需要高濃度蛋白相對比較好。