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  • 發布時間:2018-07-18 16:30 原文鏈接: 細胞計數原理

    原理:當待測細胞懸液中細胞均勻分布時,通過測定一定體積懸液中的細胞的數目即可換算出每mL細胞懸液中的細胞數量。

    操作步驟:

    1. 將計數板及蓋玻片擦拭干凈,并將蓋玻片蓋在計數板上。

    2. 輕輕吹打細胞懸液,使細胞均勻分布。吸出少許細胞懸液滴在細胞入口,使細胞懸液充滿蓋玻片和計數板之間,靜置1~2min,使細胞沉降。注意蓋玻片下不要有氣泡,也避免細胞懸液進入旁邊的槽中。

    3. 在顯微鏡下對A/B/C/D四個大格內的細胞進行計數,壓在大格四周邊線上的細胞只計數壓在2條邊線上的細胞(如右側和下方)。若鏡下有2個細胞組成的細胞團,則應按單個細胞計算;若細胞團數量較多,占細胞總量的10%左右,則說明細胞分散不好會導致計算不準確,需要重新制備細胞懸液。

    4. 按公式計數細胞數量   細胞數/mL=四個大格內細胞總數×104/4

    (每一個大格的體積為長1mm×寬1mm×高0.1mm=0.1mm3,1mL=1000 mm3,因此計算時需×104)

    細胞活力檢測

        在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞,總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力。由組織中分離細胞一般要檢查活力,以了解分離的過程對細胞是否有損傷作用;復蘇后的細胞也要檢查活力,了解凍存和復蘇的效果。細胞懸液制備后,zui常用活體染料臺盼藍對細胞染色,進行細胞計數。

        正常細胞胞膜完整,臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色;而喪失活性或細胞膜不完整的細胞胞膜通透性增加,臺盼藍能進入細胞內而使細胞著色(藍色)。

    操作步驟:

    1. 配制4%臺盼藍母液:稱取4g臺盼藍,加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100mL,用濾紙過濾,4℃保存。使用時用PBS稀釋至0.4%。

    2. 胰酶消化貼壁細胞,制備單細胞懸液,并作適當稀釋(106 cells/mL)。

    3. 取少量細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合,輕輕吹打混勻,染色2~3min。

    4. 顯微鏡下觀察,死細胞著淺藍色并膨大,無光澤;活細胞保持正常形態,無色透明有光澤。若需計算活細胞率則將染色的細胞懸液滴入細胞計數板計數。

    活細胞率(%)= 活細胞總數/(活細胞總數+死細胞總數)×100%

    注意事項:臺盼藍染細胞時,時間不宜過長。否則,部分活細胞也會著色,會干擾計數的準確性。


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