細胞計數實驗

細胞懸液

臺盤藍酒精培養液

吸管

1.  計數板

用96%酒精沖洗計數板后，用干凈鹿皮擦凈，另擦凈蓋片一張；把蓋片覆在計數板上面，使之微微移向一側，露出計數板臺面少許，以便滴加細胞懸液；

2.  染色

取吸管1 支，伸入培養瓶中，輕輕反復吹打細胞懸液使細胞重懸均勻后，立即吸細胞懸液少許，向另一離心管中滴入細胞懸液9 滴，再滴入臺盼藍染液1 滴，混勻，置2~3 分鐘；

3.  加懸液

把計數板平放在顯微鏡臺上，立即從計數板邊緣輕輕滴1~2 滴已染色的細胞懸液，使之充滿計數板和蓋片間空隙中；

4.  鏡檢

鏡下觀察可見細胞分散各處，健康細胞胞體完整，透明不著色，凡著色細胞均為不健康者。計算四角大方格內的細胞數；壓中線者只計算左線和上線者，右線和下線不計算在內（即僅計算壓兩個邊的細胞）。



按下公式計算

5.  接種培養

通過計數測知懸液中細胞數后，可根據實驗所需細胞數量向培養容器中接種。細胞接種數量隨實驗目的、血清含量和細胞生物性狀而定；一般接種量在1~10x10⁵細胞/毫升范圍，實驗周期短，希望細胞增殖較快時，接種量可大些。用含血清量大的培養液培養胚胎來源細胞、無限細胞系和惡性細胞系時，細胞接種數量不宜太大。

1.  向計算板中滴細胞懸液時要干凈利落，勿令液面蓋過蓋片，加量要適當，過多易使蓋片漂移，過少易出現氣泡；不理想時應重做；

2.  鏡下計數時，偶見有由兩個以上組成的細胞團，應按單個細胞數計算，如細胞團數占10%以上，說明消化不充分；功細胞數少于200 個/10 平方毫米或多于500 個/10 平方毫米時，均說明稀釋不當，需重新制備細胞懸液，再重計數；

3.  經常使用同一細胞在相同條件下工作時，對各種情況已做到心中有數情況下，可略去某些環節，如染色檢查等；計算板計算細胞數法有一定誤差，用作測定細胞生長曲線時，每一樣品應重復計算4 次，取均值，較為可靠，若有電子細胞計數儀器當然更好；

4.  體外培養細胞在懸液中呈圓形，平均直徑8~10 um，當被接種到底物上生長時，經過延展后，則呈扁形，在底物上所占的面積按直徑算可達20~25 微米，則1cm²的底物上可容納4~5 萬個這樣的細胞，這是理論上的數值，但在實際應用中，當細胞達到80%匯合狀態時便應做傳代處理，因此細胞數量比上述理論數量少。