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  • 發布時間:2019-04-04 22:45 原文鏈接: 細胞的PFA固定實驗——懸浮法

    當純凈甲醛在水溶液中溶解時,會自動聚合成長鏈的多聚甲醛。其長度不一,在水中同時進行聚合與解聚反應。甲醛易溶于脂類物質,因此能穿過細胞膜進入細胞內。用多聚甲醛固定細胞時,能使細胞內的自由氨基基團發生化學交聯。當不同的分子發生交聯時,形成一網狀結構,把細胞的各個結構成分連接起來。

    實驗材料

    細胞懸液

    試劑、試劑盒

    PFAPBS

    儀器、耗材

    載玻片加濕盒玻璃染色盤

    實驗步驟

    1.  吸取濃度為2×107細胞/ml 的細胞懸液10 μl,滴于多聚L-賴氨酸包被的載玻片上。置于加濕盒中,使細胞靜置30 min。 


    2.  將玻片放入玻片架,浸于盛有4%PFA固定液的染色用玻璃盤中,室溫固定 20 min。

     

    3.  將玻片架移至另一盛有3×PBS的盤中,放置2 min(此步終止PFA固定作用)。

    4.  將玻片架移至一新的含1×PBS的盤中,放置2 min。換1×PBS后,再放置2 min。


    5.  在盤中相繼加換50%、70%、95%、100%乙醇,在毎種溶液中放置5 min 以進行脫水。

     

    6.  在空氣中使玻片完全干燥,放于有干燥劑的玻片盒中,-70℃存放(可存數周)。

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