細菌增殖曲線的測定

實驗方法原理

將少量細菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養基中，在適宜的條件下進行培養，定時測定培養液中的菌量，以菌量的對數作縱坐標，生長時間作橫坐標，繪制的曲線叫生長曲線。它反映了單細胞微生物在一定環境條件下于液體培養時所表現出的群體生長規律。依據其生長速率的不同，一般可把生長曲線分為延緩期、對數期、穩定期和衰亡期。這四個時期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養條件的不同而有所改變。因此通過測定微生物的生長曲線，可了解各菌的生長規律，對于科研和生產都具有重要的指導意義。 測定微生物的數量有多種不同的方法，可根據要求和實驗室條件選用。本實驗采用比濁法測定，由于細菌懸液的濃度與光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度，并將所測的OD值與其對應的培養時間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線。

實驗材料 大腸桿菌

試劑、試劑盒 牛肉膏蛋白胨氯化鈉

儀器、耗材 天平分光光度計比色杯恒溫搖床滅菌鍋、吸管試管三角瓶

實驗步驟

一、實驗主要儀器設備及材料

天平，721分光光度計，比色杯，恒溫搖床，滅菌鍋、無菌吸管，試管，三角瓶。

菌種：大腸桿菌。

培養基：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉液體培養基

二、實驗方法、操作步驟

1.  種子液制備

取大腸桿菌斜面菌種1支，無菌條件下，挑取1環菌苔，接入無菌牛肉膏蛋白胨培養液中，靜止培養18 h作種子液。

2.  接種培養

用無菌吸管準確吸取2 mL種子液，加入裝有50 mL無菌牛肉膏蛋白胨培養液的250 mL三角瓶中，并于37 ℃下振蕩培養（振蕩頻率250 r/min）。

3.  生長曲線測定

分別在0、1、2、3、6、9、12、15、18、21 h取下三角瓶，吸取1 ml培養液，用未接種的培養液為空白對照，將上述培養液于波長600 nm處比色(測定OD值前,將待測定的培養液振蕩,使細胞均勻分布)，但要求消光度在0.10一0.65之間，對濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養基適當稀釋后測定，經稀釋后測得的OD值要乘以稀釋倍數，才是培養液實際的OD值。

4.  實驗結果

（1） 將不同時間點測定的OD值填入下表

（2）以上述表格中的時間為橫坐標，OD600值為縱坐標，繪制大腸桿菌的生長曲線。