1. 取體重25 g左右健康小白鼠兩只，分第標記1，2號。
2. 取1號小白鼠，用右手輕拖鼠尾，使其爬行粗糙物面上，再用左手拇，食兩指抓緊小白鼠頸項及其兩耳，左手掌握住鼠體，小指按住鼠尾以75%酒精棉球消毒腹部皮膚，腹腔應注射破傷風抗毒素0.2 ml（1500 單位/毫升），經30 min后，于小鼠右后腿肌肉注射破傷風外毒素（1：100稀釋）0.2毫升。
3. 取2號小白鼠，在右后腿肌肉內注射破傷風外毒素（l：100稀稀）0.2毫升。
4. 將以上兩只小白鼠分籠喂養，逐日觀察有無發病，發病者常表現為肌肉痙攣，患腿僵硬。病變由局部蔓延至全身。于2～3日內死亡。
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