細菌的裂解氣相色譜鑒定實驗

實驗方法原理

氣相色譜技術（gas chromatography，即 GC）是色譜技術的一種，其試驗儀器氣相色譜儀主要由載氣系統、進樣系統、色譜柱、檢測器和記錄儀或數據處理裝置等組成，如圖 1。

該技術的基本原理是試驗樣品中的各組分。隨流動相（氣體）經過裝在色譜柱中的固定相而流動，吸附力或溶解性弱的組分很難被吸附或溶解在固定相中，流動快，首先流出色譜柱，而吸附力或溶解性強的組分則后流出色譜柱，因此樣品中各組分便能分離開，被分離開的組分依次使檢測器能檢測到，記錄儀在記錄紙上則依次記錄被分離開的組分，每一組分呈一色譜峰，或同時由數據處理裝置直接計算和打印出試驗結果。根據注入樣品開始到出現色譜峰最高點為止的時間（稱為保留時間 tR）、色譜峰的高度 h 和色譜峰寬度 W 等試驗數據，或其他補充試驗的數據，可以對樣品中各組分定性和定量。氣相色譜技術分離樣品組分的原理見示意圖 2。

實驗材料 二株革蘭氏陰性細菌二株革蘭氏陽性球菌二株芽孢桿菌

試劑、試劑盒 無菌水生理鹽水

儀器、耗材 氣相色譜儀進樣系統的配件裂解爐氫離子火焰檢測器不銹鋼色譜柱離心機

實驗步驟

1. 將菌株分別接種在瓊脂營養斜面上，37℃ 培養 24 h，用接種環取下菌苔，切勿帶有培養基，將菌苔放入盛有生理鹽水的塑料小離心管中，1000 r/min 離心 5min，再用無菌水洗滌菌體三次，洗滌時的離心速度、時間都同前，只是最后一次離心10 min，棄去洗滌液，然后在電吹風氣流下脫水 15 min，制成待鑒定的細菌樣品。

2. 選擇裂解色譜條件為：裂解溫度 800℃，裂解時間 10 s，進樣口溫度 260℃，檢測器溫度 280 ℃，拄起始恒溫 80℃ 恒溫 4 min 后，6 ℃/min，氫氣 45 ml/min，空氣 450 ml/min，記錄儀紙速 8 mm/min。

3. 待調試色譜儀運轉正常后，取待鑒定的細菌樣品 1.5 mg，置于裂解頭鉑舟內，然后插入裂解爐內，停留裂解 10 s，按上述選擇的裂解條件進行試驗，每個樣品在色譜儀中分離時間為 25min。

每個樣品的色譜鑒定，必須嚴格保持裂解色譜條件一致。

4. 從記錄儀上取下記錄有樣品各個色譜峰的記錄紙，或從數據處理機上取下記錄有直接計算出的樣品各個色譜峰分析結果的記錄紙。