細菌的革蘭氏染色實驗

實驗方法原理 G＋菌細胞壁肽聚糖含量多，結構致密，脂質少，乙醇不易滲入脫色；G－菌細胞壁肽聚糖含量少，結構疏松，脂質多，乙醇容易溶解脂質而滲入脫色。G＋菌菌體含有大量核糖核酸鎂鹽，能與結晶紫、碘牢固結合，使乙醇不易將其脫色；G－菌菌體核糖核酸鎂鹽含量少，容易被乙醇脫色。G＋菌等電點比G－菌低，在同樣PH值條件下比G－菌所帶負電荷多，容易與帶正電荷的堿性染料（結晶紫），故不易被乙醇脫色。

實驗步驟

1. 制備標本片

（1）取干凈載玻片1塊，用記號筆劃分為2個區域，并作好標記；

（2）兩區各加生理鹽水1小滴

（3）用滅菌接種環分別挑取少量細菌，在個生理鹽水中混勻鋪開，形成一薄層菌膜。

（4）在室溫下自然干燥。

（5）將標本通過火焰2～3次固定標本，自然冷卻。

2. 革蘭氏染色

（1）初染：在菌膜上滴加結晶紫，以蓋滿菌膜為度，約1分鐘后，用細水流將染液沖洗。

（2）酶染：滴加盧戈氏碘液數滴，約1分鐘后輕輕沖洗。

（3）脫色：滴加95%酒精3～4滴，輕輕晃動玻片數秒鐘，傾斜玻片棄去酒精，如此反復數次后，流下的酒精幾乎無色或稍呈淡紫色，最后沖洗。

（4）復染：滴加稀釋復紅染液數滴，約1分鐘后沖洗。

染色完畢后，用吸水紙將玻片吸干，滴加香柏油，鏡檢。

3. 結果判定：白色葡萄球菌被染成紫色，為革蘭氏陽性（G＋）菌，大腸桿菌被染成紅色，為革蘭氏陰性（G－）菌。