許多細菌自細胞內長出一至許多根細絲狀附屬物稱為鞭毛.鞭毛是細菌的運動器官,有鞭毛的細菌均可運動.鞭毛細長透明,其寬度在普通光學顯微鏡波長檢驗范圍之外,所以不易觀察.但是在不染色情況下可以檢測到細菌的運動推斷鞭毛的存在.
【實驗目的】
學習并掌握鞭毛染色的原理和方法.
【實驗原理】
細菌的鞭毛非常纖細,直徑一般在20nm左右,用電鏡才能觀察.本實驗采用特殊染色法,即在染色前先經媒染劑處理,媒染劑吸附在鞭毛上,使鞭毛加粗,便可達到普通光學顯微鏡的辨析范圍以內.染色后,即可利用普通光學顯微鏡進行觀察.
【實驗材料、藥品及器具】
1、菌種 培養18-24h的菌種
大腸桿菌(Escherichia coli)
普通變形桿菌(Proteus Vulgaris)
熒光極毛桿菌(Pseudomonas fluorescens)
2、染色液 鞭毛染色液甲
鞭毛染色液乙(實驗前配好的新鮮染液)
3、器皿 顯微鏡、酒精燈、洗瓶裝蒸餾水、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、干凈載玻片、玻璃缸、無菌水三管、滅菌長滴管三支.
【實驗步驟】
1、用長滴管取無菌水輕輕移入長好菌種的試管內,培育20-30min使細菌自己慢慢游入水中并充分舒展其鞭毛,使水呈輕度混濁.
2、取一滴菌懸液滴于玻片的1/3位置上,然后輕輕抬起此端,使懸液緩慢流至玻片另一端,平放使其在空氣中自然干燥固定.切忌用火焰烘干.
3、在涂片部位滴甲液,染色3~5min.
4、用蒸餾水輕輕沖洗.
5、加乙液染30~60s,可在酒精燈上稍稍加熱.沖洗多余的染液.
6、制片干后檢查.
【實驗結果】
1、顯微鏡下檢查鞭毛染成什么顏色和形狀.
2、比較菌種鞭毛著生的位置、數目并繪圖.
【思考題】
1、菌種的培養時間與鞭毛染色有什么關系?
2、你在顯微鏡下看到的鞭毛是否為原來的大小和形狀?
3、鞭毛涂片與芽孢涂片有何區別?為什么?