終點PCR中的頂配—熱啟動PCR聚合酶組合的使用方法（一）

     每次PCR實驗都要到處找冰盒，鏟冰…… 各種怕溫度敏感的酶在小小的PCR小管里發生不該發生的story，比如非特異擴增，悄悄地合成引物二聚體等，最后P出來各種條帶，我們就要cry了。

       那么，如果我們使用了熱啟動DNA聚合酶，故事就不一樣了。經過化學修飾的TaqDNA聚合酶，對溫度“炒雞”穩定，PCR加樣再也不需要到處找冰盒鏟冰，小心翼翼的忐忑了。HoT FIREPol?熱啟動DNA酶常溫穩定一個月，只有溫度達到95℃才會被激活。所以我們再也不必擔心加樣的過程以及升溫之前，PCR就開始反應，合成不需要的片段。做到隨意PCR 如吃瓜！
 

       好啦，言歸正傳，吃瓜的同時，我們來點專業解釋：

       在傳統的PCR反應中，反應體系各成分（Taq DNA聚合酶、dNTP 和引物等）均是一次加入并進入循環，在反應溫度由室溫（25℃）上升至高溫（94～95℃）過程中，可能發生引物錯配和二聚體的形成。引物與模板中一些非靶位點的錯配和引物之間形成的二聚體，在Taq酶的作用下均可延伸，這些非特異性產物又可以在后面的PCR循環中繼續擴增，使非特異性產物不斷積累，同時，也消耗反應體系的各成分，最終PCR擴增的特異性產物大大減少。熱啟動PCR(hot start PCR)是指DNA聚合酶只有在樣品溫度至少超過70℃時才發揮作用的PCR。通過這種方式控制PCR反應的必須組分DNA聚合酶，直到反應混合物被加熱到可以阻止非特異引導和引物聚合的溫度后，再啟動PCR達到有效擴增特異性PCR產物的目的。

       熱啟動PCR循環是這樣的，為了充分激活酶，比普通PCR增加了熱激活步驟。

       PCR的靈魂—熱啟動DNA聚合酶

       與TaqDNA酶不同，熱啟動DNA聚合酶是經過化學修飾的Taq酶，常溫操作時其沒有活性，只有高溫才能激活酶，可以避免低溫或者常溫操作時非特異性擴增以及引物二聚體的產生。這款Solis 熱啟動 FIREPol DNA 聚合酶更靈敏，特異性更強，可以常溫操作，常溫穩定1個月。同時，PCR產物可以無憂做下游實驗DHPLC和TA克隆。

熱啟動PCR-第一款

熱啟動DNA聚合酶組合套裝（貨號# 01-02-xxxxx）

       給你最大自由度的一款PCR組合，它的組分有：

       1.熱啟動DNA 聚合酶

       2.反應buffer1---10x 反應液B1(不含Mg2+和去污劑)

       3.反應buffer2---10x 反應液B2 (不含Mg2+)

       4.25 mM MgCl2

       5.10x Solution S

       細心的同學已經發現，為什么一般的PCR體系只有一個buffer，而這個卻有兩個？

       小編為你解密啦！之所以包含兩款Buffer 是為廣大用戶考慮的，如果你的樣本不需要去污劑，或者需要自由調整Mg2+濃度，這款給你最大自由度 ，可以按照您實驗需求調整方案。而這款套裝的最大的寶藏是組分Solution S，常規PCR不需要它，但是如果你遇到擴增困難的模板，或者高GC含量模板，10x Solution S 就要登場啦，并且你可以根據需要調整它的工作濃度，1×，2×，3×.

       漂亮的數據告訴你它有多好！

       數據顯示HoT FIREPol?熱啟動DNA酶可以很好的擴增基因組DNA片段

       擴增人基因組DNA的4個片段：1，2為HoT FIREPol?DNA聚合酶；3,4為競品A公司；5,6為競品B公司。