結締組織觀察實驗（一）

實驗材料 大白鼠小白鼠

試劑、試劑盒 臺盼藍生理鹽水溶液甘油瑞特染液

儀器、耗材 解剖器一套注射器及針頭滴管載玻片蓋玻片顯微鏡

實驗步驟

一、材料和用具

大白鼠或小白鼠。皮下結締組織經活體染色及彈性纖維染色和H－E染色的平鋪片、氣管切片（H－E染色）、小腸切片（H－E染色）、小白鼠腸系膜平鋪片（蘇丹Ⅲ染色）、跟腱切片（H－E染色）、淋巴結切片(H－E染色)、淋巴結銀染色切片、骨磨片。疏松結締組織的電鏡圖片。

1％的臺盼藍（trypan blue）生理鹽水溶液、甘油、瑞特（Wright）染液。

解剖器一套、注射器及針頭、滴管、載玻片、蓋玻片、顯微鏡。

二、操作

疏松結締組織

（一）疏松結締組織活體染色標本的制作與觀察

取一大白鼠（或小白鼠），從皮下注射1％臺盼藍生理鹽水溶液少許，30 ~ 60 min后，將鼠殺死。剪開皮膚，在注射處附近剪取一小塊皮下結締組織，置一載玻片上。然后，左、右手各持一根解剖針，將組織挑開平鋪于載玻片上。待標本稍干后，加1~2滴甘油，蓋上蓋玻片即可觀察。

1. 低倍鏡觀察 區分膠原纖維及彈性纖維。膠原纖維不著色，為透明的白色。彈性纖維較膠原纖維細，呈淺黃色。

2. 高倍鏡觀察 根據細胞的形狀、胞核的形狀與染色，以及胞質內的顆粒等區別成纖維細胞及巨噬細胞。成纖維細胞呈多突起扁平狀。巨噬細胞形狀不規則，胞質內含有藍色顆粒。

（二）臺盼藍活體染色及Weigert彈性纖維染色法染色，并經H－E對比染色的貓或兔皮下結締組織平鋪片的觀察。

1．低倍鏡觀察 選擇標本較薄而又均勻處觀察，可見交叉成網的纖維及散在分布于纖維之間的結締組織細胞。

2．高倍鏡觀察 先區分纖維，然后區分細胞。用此法可顯示膠原纖維及彈性纖維。在纖維之間散布有結締組織細胞，在此主要要求分辨成纖維細胞及巨噬細胞。

（1）膠原纖維 被染成粉紅色的粗細不等的細帶狀。它們相互交叉排列，數目較多。膠原纖維分辨不清。有時膠原纖維呈波浪狀。

（2）彈性纖維 被染成深紫褐色，其斷端常呈卷曲狀。比膠原纖維細，單條，有分支，連結成網。

（3）成纖維細胞 數目最多，胞質染色淡，輪廓不甚明顯，仔細觀察呈多突扁平狀。胞核大，多為橢圓形，染成藍紫色。

(4)巨噬細胞 細胞形狀不一，呈圓形、橢圓形或不規則形。由于經過活體染色，所以可見其胞質內含有吞噬的臺盼藍顆粒。胞質染色較深，細胞輪廓較成纖維細胞清楚。胞核較小，為圓形、橢圓形或腎形，胞核染色也較深，為深藍紫色。

另外，在平鋪片中還能看到一些有粒白細胞和淋巴細胞。

（三）肥大細胞的觀察

用小白鼠（或大白鼠）為材料，取少許皮下結締組織制成平鋪片。充分晾于后滴加瑞特染液（瑞特染料0.1 g溶于60 ml甲醇中），使染液將材料完全淹沒。染1 min后，逐滴加等量蒸餾水，與染液混合均勻。靜置5 ~ 1 0min后，傾去染液，用自來水洗凈，待干后，不經封固即可鏡檢。

先用低倍鏡在平鋪片的血管邊緣找到成堆分布的肥大細胞后，換用高倍鏡觀察。肥大細胞胞體較大，圓形或卵圓形。胞核圓形，不著色。胞質內充滿粗大的紅紫或藍紫色顆粒。有時還可見到肥大細胞的脫顆粒現象。

（四）用兔氣管切片（H－E染色）觀察漿細胞和疏松結締組織在石蠟切片上的形態結構，并與疏松結締組織平鋪片作比較。

在切片上的疏松結締組織不像平鋪片那樣，纖維多被切斷，染色也有所不同。今后學習器官組織學時，所觀察的切片經常會遇到疏松結締組織在切片上的形態，故應予注意。

1. 低倍鏡觀察 在上皮的深層找到染色略淺的結構，即為疏松結締組織。

2. 高倍鏡觀察 多數為膠原纖維，染成粉紅色、較粗。與不規則分布的彈性纖維相混雜，但在切片上彈性纖維不易區別。在纖維之間有染成藍紫色長橢圓形的胞核，多為成纖維細胞的胞核。在這個區域尋找一種卵圓形的細胞，該細胞的胞核位于細胞一側，染色質呈輻射狀排列，胞質近核處有一淺染區域，這種細胞即是漿細胞。

（五）示范觀察疏松結締組織的電鏡下結構

1. 掃描電鏡下結構用結締組織掃描電鏡圖片觀察，區分膠原纖維、成纖維細胞和巨噬細胞。

2．透射電鏡下結構用結締組織透射電鏡圖片觀察。

（1）膠原纖維 可見膠原纖維縱切面上有明暗交替的周期性橫紋，橫紋周期約64 nm。

（2）成纖維細胞 細胞為多角形。胞質突起較長，胞質內粗面內質網、高爾基復合體發達，胞核較大。

（3）巨噬細胞 細胞表面有微絨毛，胞質內有大量溶酶體，近細胞邊緣有較多小泡。胞核的核質顆粒細，多聚于核膜內面。

致密結締組織

用蛙跟腱縱切片（H－E染色）觀察。

（一）低倍鏡觀察

可見染成紅色的膠原纖維束呈平行而緊密的排列。