融合抗體
近二十年來,抗體生成技術有了飛速發展,已經從細胞工程抗體(雜交瘤技術一單克隆抗體)發展到了第三代抗體:基因工程抗體,尤其是噬菌體抗體庫技術的出現,解決了人源抗體的研制問題,促進了各種性能優良抗體以及具有多種功能的抗體融合蛋白的開發。單鏈抗體(Single-chain variable fragment,ScFv)是研究得較多的一種小分子抗體,其優越性在于可在宿主細胞內大量表達,易于基因工程操作,尤其易于構建抗體融合蛋白。近年來,關于綠色熒光蛋白融合單鏈抗體的報道很多,國內也有相關報道,如程虹等報道將抗肝癌單鏈雙功能抗體融合GFP真核表達載體并導人小鼠成纖維細胞NIH3T3表達并獲得成功。因融合抗體具有與抗原結合及發射熒光兩種特性,故這一人工分子可用做免疫染色的檢測試劑,直接應用于流式細胞儀和免疫熒光的標記及腫瘤的檢測等等。
由于技術上的的原因,一般融合抗體均置于原核表達系統如E.coli中表達。為便于表達蛋白的分離純化,一般在單鏈抗體的N端或C端插入一6×His序列,便于用Ni-NTA親和層析柱純化目標蛋白。但這一技術也存在一些問題。由于抗體分子內存在二硫鍵,而在原核表達系統內由于抗體不能正確折疊,容易形成包涵體,表達出來的目標蛋白無活性,需要在氧化還原體系中進行復性。但近來也有報道在動物細胞細胞質中成功表達出具有抗原結合活性的單鏈抗體。若能成功解決融合抗體的表達問題,則在免疫染色及腫瘤檢測這一領域融合抗體將扮演極為重要的角色。