簡 介
腫瘤標志物的定義：腫瘤標志物是可以在血清、血漿、其他體液、組織提取物或石蠟固定的組織中檢測到的自然生長的分子，用于確定腫瘤存在、評價病人預后以及對病人的治療效果進行監測。腫瘤標志物存在于細胞漿和細胞核中，與細胞表面膜相連，在血液中進行循環。大多數腫瘤標志物可以用免疫學的技術進行檢測。
1998年5月，NACB（美國臨床生物化學學會）召開研討會，起草了腫瘤標志物的分析檢測以及臨床應用的指導原則。
1997年EGTM（歐洲腫瘤標志物組織）正式成立，進行臨床相關的腫瘤標志物及其檢測質量控制和標準化管理。
質量要求和質量控制
腫瘤標志物檢測前的要求
對病人的信息進行充分了解，確保實驗結果的準確性。
腫瘤標志物分析檢測的要求
滿意的測試結果來自于符合要求的標本以及經過室內質控（IQC）和實驗室間質量評價（EQA）監測評價的有效的實驗方法。室內質控和室間質控的監測評價包括實驗的重復性、采用的標準、所用基質的影響、動力學范圍、參考品、穩定性、分析結果的理論數據、實驗方法（具體內容見表1）。
自動化的免疫分析儀器所得實驗結果的分析內和分析間變異系數分別<5%和<10%，這是手工分析難以達到的。
各實驗室還應注意影響實驗特異性的因素。表2總結了三個最重要的可能引起腫瘤標志物檢測結果錯誤的原因。
腫瘤標志物分析檢測后的要求
表3列出了EGTM對腫瘤標志物分析檢測后的要求。用EQC進行實驗室間檢測結果的評價和比較非常重要。
表1：與腫瘤標志物檢測質量控制相關的實驗因素
室內質量控制（IQC）的要求
重復性
建立測定認可的標準
樣品與病人血清盡可能相似
IQC樣品的濃度適合臨床應用
評價實驗的干擾因素 理想的分析批內誤差應<5%；批間誤差<10%。
選擇合適的IQC標準。
僅僅采用試劑盒所附的質控品是不夠的，還應包括獨立來源的可靠的血清基質質控品。
應包括腫瘤標志物的陰性和低值陽性質控品。
需要較寬的濃度范圍，評價高濃度樣本稀釋后的測定準確度
要求對實驗的干擾因素（嗜異性和其他抗體、血凝試管中的凝血試劑等）進行檢查
實驗室間質量評價（EQA）的要求
適宜濃度的EQA樣本
實驗"穩定性"的評價
驗證靶值的精確度和穩定性
實驗說明 EQA樣本應具有適宜的工作濃度范圍，但有時會需要較高濃度的EQA樣本來評價實驗的稀釋步驟。對于某些分析（如：AFP、hCG）用無分析物血清檢查基線的可靠性是很重要的。
在一定時間內（6-12個月）重復進行相同樣本的測試，對實驗室內實驗結果的重復性進行評價。
指無現成參考方法時，需要對所使用的方法進行以下驗證：
1． 穩定性：對同一樣本進行重復測定。
2． 用已知濃度的相關國際標準品進行回收率實驗。
3．對不同實驗室間的檢測結果進行比較。
對實驗室間的實驗比較（參考值范圍、結果累計報告等）很有價值。
表2. 引起腫瘤標志檢測錯誤結果的潛在因素
高濃度hook效應
樣本間的攜帶
嗜異性或人抗鼠抗體（HAMA）的干擾 通常情況下，腫瘤標志物的濃度范圍會有好幾個數量級的差別，因此有可能需要確認高濃度的樣本產生的hook效應，以避免低值結果的錯誤報告。這對于首次進行腫瘤標志物檢測的病人猶為重要。（可以通過使用高結合力的固相抗體、分析兩個稀釋度的樣本、或通過后續的分析步驟包括清洗步驟來減少hook效應。）
檢測高濃度的樣本會產生樣本間攜帶的潛在問題，因此有必要對此進行隨時檢查。
IgG抗體可以和測定中使用的抗體進行反應。通常情況下，由于進行影像檢查和治療而使病人接觸鼠單克隆抗體，由此而產生的人抗鼠抗體會使腫瘤標志物的檢測出現錯誤結果。（可以通過使用阻斷劑對樣本進行前處理、在反應基質中加入非免疫的鼠血清或對樣本進行稀釋后再進行分析的方法來減少HAMA的干擾。）
表3.腫瘤標志物檢測分析后的重點要求
通過詢問醫生獲取病人的臨床信息
參考值范圍的有效性
了解顯著變化或臨床相關變化的組成因素
改變方法時應進行方案確認
了解腫瘤標志物的半壽期
腫瘤標志物臨床應用的比較 有必要鼓勵臨床醫生提供帶有說明的簡短的臨床信息（如手術后、化療后等），這有助于確認偶然誤差（如可能出現的儀器上加錯標本等）。
通常來自相應的健康人群的參考值范圍與初始治療前的腫瘤病人有很好的相關性。因此，病人自己的"基線"值對于腫瘤標志物的測定結果具有非常重要的參考意義。只有基于有效的參考范圍，增高甚至在參考范圍增高才有臨床顯著性意義。
應包括生物學變異和分析數據的變異。確定的±25%的升高或降低認為具有臨床意義，但須進行進一步的工作。
有助于確認由于改變方法而引起的腫瘤標志物檢測結果的差異。（可能需要對以前檢測過的樣本再用新的方法進行檢測來確認結果的差異。）
確定完全去除腫瘤組織后體循環中腫瘤標志物減少50%所用的時間。
首先需要得到有關腫瘤標志物臨床應用的信息，再由有關的專業組織進行考察比較。
乳 腺 癌
美國2002年診斷出203，500多例乳腺癌新增病例， 39，600名婦女死于乳腺癌。美國婦女在一生中大約有11%的機會患乳腺癌。目前，美國超過1000，000的婦女患有Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌。雖然目前的醫學水平還不能預防和完全治愈乳腺癌，但隨著醫學診斷和治療水平的發展，越來越多患者的病情都能得到有效控制。另外，乳腺癌的早期診斷（包括病人乳房的自我檢查、乳房X射線檢查、和臨床檢查）能夠顯著降低病人的死亡率。雖然腫瘤標志物不能代替影像檢查，但可以為病人的臨床診治提供有用的信息。腫瘤標志物臨床上主要用于選擇治療方案、預測疾病進程和復發以及對治療效果進行監測。
以下為正在使用或建議使用的腫瘤標志物：
雌激素和孕激素受體
CA15-3
BR27.29(CA27.29)
CEA
HER-2/neu(c-erb B2)oncoprotein
雌激素和孕激素受體
雌激素和孕激素受體是主要的乳腺癌組織腫瘤標志物，包括p53,c-erb B2(HER-2/neu)等類固醇受體。類固醇受體是目前納入標準細則（14-17）中唯一的組織標志物。雖然NACB或EGTM在起草指導原則時還來不及考慮其他的指標，但現在HER-2/neu的檢測結果已經用于決定乳腺癌轉移的病人是否應該接受單克隆抗體Herceptin(trastuzumab)的治療。
雌激素和孕激素受體的臨床應用
除了乳腺癌的一般特征，如腫瘤大小、病理學類型、腋窩淋巴結狀況外，蛋白質生物標志物在評價腫瘤的生長速度、侵襲力和惡變可能的差異上也是很有價值的。雌激素和孕激素受體已經用作激素[如：tamoxifen,toremifene,droloxifene("抗雌激素")、medroxyprogesterone acetate和megestrol acetate]治療反應的預測指標。雌激素和孕激素受體的水平還作為預測指標用于評價激素治療的么應和副反應。另外，性激素受體也是診斷評價乳腺癌或類似病例的預后因子。
總的來說，雌激素受體陽性的腫瘤病人至少在短期內預后良好，而雌激素受體陰性的病人通常為惡性腫瘤患者。大約30%腫瘤雌激素受體陰性或大于75%腫瘤雌激素受體陽性的乳腺癌病人會發生腫瘤轉移并且在10年內死亡。雌激素和孕激素受體已經和其他因子一起作為預后的檢測指標以區別高復發危險（預后不良）和低復發危險（預后良好）乳腺癌病人的腫瘤類型。美國臨床腫瘤協會（ASCO）的臨床實踐指導原則同意根據雌激素和孕激素受體的水平確定絕經前和絕經后乳腺癌病人的腫瘤是否轉移以及對臨床治療進行指導。
圖1為乳腺癌病人活檢的激素應答潛在功能的性激素受體分布狀況。活檢組織中雌激素和孕激素受體的4種組合分布狀況的百分比分別表示對各年齡組病人的檢測情況。
參考值范圍
由于很少對不患有乳腺腫瘤的婦女進行雌激素和孕激素受體的檢測，因此參考值范圍還不確定。配體結合技術和酶免疫分析技術的測定結果表明，沒有腫瘤的乳腺組織中性激素受體含量很低（<15fmol/mg蛋白質）或檢測不出性激素受體，這已被用免疫組織化學檢測的許多研究所確認。通常以10fmol/mg提取的蛋白質（通過配體結合）或15fmol/mg蛋白質（通過酶免疫分析）作為Cut-off值。未知病理來源的轉移的腫瘤中雌激素和孕激素受體的存在提示有原發性激素應答的乳腺癌或其他性激素應答的腫瘤。活檢組織中雌激素和孕激素受體的分布受病人年齡和絕經狀況的影響。一般情況下，絕經前的乳腺癌女性患者的受體水平比絕經后低。由于乳腺癌患者的激素治療方案是由其激素應答決定的，而激素應答又與她們活檢的腫瘤組織中雌激素和孕激素受體含量有關，因此需要對病人的受體水平進行檢測。
雌激素β受體和其他性激素受體的變異
調查表明，調控蛋白表現出多態性。例如，已經發現的一個新的雌激素受體基因-雌激素β受體（ER-β）和已經過廣泛研究的雌激素α受體（ER-α）在DNA和配體結合區域顯示出一定程度的同源性（同源性分別為96%和58%），但這兩個異構體的配體鍵合比例和生物活性不同。ER-β跟ER-α和孕激素受體（PR）共同表達伴隨一些低生物侵襲性的乳腺癌腫瘤指標提示，ER-β陽性的腫瘤傾向于對抗雌激素治療產生應答，但還需要進一步建立獨立的ER-β預測值。 在過去10年發現的大約20種性激素受體變異體由于斷裂、外顯子刪除和點突變而顯出缺陷，因此有必要進一步研究出新的試劑和參考樣本，以調查這些自然產生的異構和變異的臨床意義。
分析前注意事項和標本保存
不論選擇何種分析技術，正確選擇和處理乳房組織的活檢樣本對于檢測結果的重復性是非常必要的。首先，外科手術切除組織后，應在最短的時間內將其冷凍于-20℃，并在冰凍狀態下運送至實驗室。必須在進行組織提取前完全取出用于制作冰凍切片的最適切片溫度（OCT）復合物；如果使用了染料（諸如市售的Davidson染料藥盒），應去除帶有染料的組織；且避免使用出血組織和連帶有大量正常部分的活檢組織。
組織提取物中的性激素受體在室溫下不穩定，4℃下2～4小時內失活。組織提取物應在提取后立即置于-70℃冷凍。冰凍組織提取物中受體的穩定性取決于腫瘤的種類、組織包含的血和正常組織以及一些其他因素。如果提取物在48小時內未使用，應用剩余的組織重新進行組織提取。
分析中的注意事項
現有的放射配體結合分析和酶免疫分析（使用標準化的試劑和穩定的參比樣本）方法的精密度（CV%為4～15%）高于臨床診斷的要求。在雌激素和孕激素水平為30～50 fmol/mg提取蛋白時，臨床診斷治療所要求的總不精確度為10～20%，而當雌激素和孕激素水平>100fmol/mg提取蛋白時，臨床診斷所要求的總不精確度則為30～40%。