從 1971 年（Bernardi，1971;Gorbunoff，1990) 就已經幵始定期發表關于 HA 對蛋白質吸附與解吸附的綜述。最近的一篇文獻 (Kandorietal.，2004) 引用了較早闡述的機制，酸性蛋白質通過 C(鈣)-位點結合, 而堿性蛋白質通過 P(磷酸鹽)-位點結合。C-位點和 P-位點首先由 Kawasaki 等 (1986) 提出，隨后 Gagnon(1996)Xt 其進一步探討并強調了 C-位點在單克隆抗體純化中的重要性: 部分單克隆抗體的結合是通過鈣配位絡合物 (calciumcoordinationcomplexe) 與抗體中的羧基簇（carboxylcluster) 發生作用。HA-蛋白質間的相互作用可簡化為下述內容: 氨基可以吸附于 P-位點，但受到 C-位點的排斥; 對于羧基來說，情況相反且更復雜。盡管胺類可以結合于 P-位點，但是其羧基最初是通過靜電作用與 C-位點相互吸引的，與 C-位點的結合還涉及比陰離子交換更強的螯合配位鍵。
例如，Kawasaki(1991) 所述，對于蛋白質和其他溶質與 C-位點的相互作用，磷酰基比羧基更強。
Don 等 (2007) 進一步的研究工作圍繞骨-蛋白質間的相互作用展開，目的是研究蛋白質中凈電荷為 o 的一 OH 基和一 NH2 基與 HA 表面的機械作用。受控分子動力模擬表明，HA 表面與骨形態形成蛋白（bonemorphogeneticprotein)(用于骨形成的生長因子）的一 0 H 基和_NH2 基通過水橋 (water-bridged)H-鍵形成強相互作用。Shen 等 (2008) 用纖連蛋白片段（FN-DIlO) 證實了 Don 等的觀察結果。上述及一些類似研究均支持 C-位點和 P-位點模型。HA 表面已經分別建議用于組氨酸標記蛋白質 (如六聚組氨酸標記的蛋白質) 的純化, 以及富含組氨酸的免疫球蛋白 G(IgG) 的純化 (Ngetal.，2007)。在這種情況下，基于六聚組氨酸標記的和未標記的融合蛋白質的共洗脫，轉-組氨酸的相互作用會顯得很輕微。蛋白質吸附機制與 Gorbunoff(1990) 先前所述一致，引入水橋 H-鍵作用機制是對其進行了改進。
如果上樣緩沖液中含有磷酸鹽，那么有些蛋白質將不會吸附于 HA。Ferguson 等 (1980) 提出，在這種情況下通常可以使用 Good’s 緩沖液。例如，Schirch 等 (1985) 純化的大腸桿菌表達的絲氨酸羥甲基轉移酶，首先通過陰離子交換獲得組分均一的樣品，再以 pH7.0,20 mmol/LJV，JV-2-(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸 (BES) 作為上樣緩沖液平衡 HA 層析柱，繼而采用較小的磷酸鹽梯度洗脫。
通過逆轉 P-位點相互作用、C-位點相互作用的兩種形式和/或 H-鍵，可以實現蛋白質解吸附。線性和分步梯度的磷酸鹽緩沖液是最常用的解吸附試劑。另外,Freitag 和 Breier(1995) 提出蛋白質可通過它們所帶的凈正電荷與 HA 表面所帶凈負電荷間的靜電作用而固定在層析柱中, 但可以向磷酸鹽緩沖液中加人陰離子使蛋白質去吸附, 或加人陽離子通過它們所帶的凈負電荷與 HA 表面的凈正電荷相互作用而使那些固定的蛋白質解吸附。Gorbunoff(1984a;l984b) 及 Gorbunoff 和 Timasheff(1984) 發表的一系列文章已經討論了 Cr、F’ClOr、SCN-和磷酸鹽的作用。Schktterer 等 (2006) 采用氟化物離子將前列腺素 D 合酶從陶瓷化 HA 層析柱上解吸附。該酶來自于牛的腦脊髓液, 吸附后，以含有 NaF 的 10 mmol/LpH6.25 的磷酸鈉緩沖液進行一系列地解吸附。他們分別以 150~750 mmol/LNaF 和 375~750 mmol/LNaF 作為線性梯度。
解吸附作用也明顯受緩沖液
PH 的影響。根據 Ogawa 和 Hiraide(1996) 的研究，在較低的磷酸鹽濃度條件下，PH 大于 7.0 時蛋白質的洗脫比 pH
小于 7.0 時更迅速，且 I 型和 n 型多孔陶瓷化 HA 的洗脫順序是相似的, 但是對于 I
型層析柱，蛋白質解吸附需要更強的磷酸鈉緩沖液。與此類似，在 pH 為 5.5~6.8 時，緩沖液的 pH
同樣會影響多孔陶瓷化氟磷灰石層析柱蛋白質的解吸附。表 24.1 比較了在上述范圍內，采用規格為 I-ICmX15 cm 的 I 型陶瓷化 HA
和陶瓷化氟磷灰石層析柱分離多種蛋白質的洗脫時間。該層析柱采用 pH10、0.2mol/L 磷酸鹽緩沖液灌裝，再以
pH5.5、pH6.OSpH6.8 的 5 mmol/L 的磷酸鈉緩沖液平衡。蛋白質的洗脫順序并不是僅僅取決于其 PI。根據
Gorbunoff(1984a;1984b) 的觀點，某些蛋白質的解吸附還取決于它們的結構及羧基的含量。