實驗方法原理 這一方法是濃縮大量病毒懸液和初步純化病毒的常用方法之一。 PEG 是環氧乙烷和水縮合而成的水溶性非離子型聚合物,相對分子質量為 2 000-6 000 的 PEG 多用于濃縮病毒,其中以 PEG6 000 效果最好。 PEG 濃縮法能成百倍的濃縮病毒,而且對病毒的結構和抗原性有保護作用。
實驗材料 待純化的病毒
試劑、試劑盒 聚乙二醇
儀器、耗材 燒杯透析袋(可選)
實驗步驟
操作方法有以下三種。
1. 直接加入法 當只有少量的病毒懸液時采用此法。在病毒懸液中加入 8%~10% 的PEG攪勻使病毒沉淀。此法須以密度梯度離心法去除病毒沉淀物中的 PEG 。
2. 液體濃縮法 ①用超聲波或凍融的方法使細胞破碎釋放病毒,3 000 r/min 離心 30 min,除去細胞碎片;②緩慢攪動并加入 NaCl , 使最終濃度為 0. 5mol/L NaCl , 再加人等量的 PEG,4℃過夜;③8 000r/min 離心 30 min, 收集病毒沉淀;在病毒沉淀中加入適量的PBS 緩沖液, 4℃過夜; 10 000r/min 離心 1 h。③必要時可用梯度離心或其他方法進一步純化。分離大量病毒宜用此法。
3. 固體濃縮法 將欲濃縮的病毒懸液約 100 ml 置于透析袋內,必須扎緊透析袋口,放入適量的 PEG 固體,置 4℃約 24 h 即可將病毒懸液濃縮至 10 ml 左右。此法透析袋內的鹽分隨液體一起透析出,濃縮后懸液的鹽分不升高。