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  • 發布時間:2019-04-12 16:38 原文鏈接: 聚凝膠法交叉配血實驗

    實驗方法原理紅細胞表面帶有大量的負電荷,以避免其產生自發性凝集。當紅細胞懸浮在電解質時,陽離子會被紅細胞的負電荷所吸引,此的紅細胞剛被擴散的雙層離子云所圍繞,而形成Zeta電位,Zeta電位決定紅細胞之間的排斥作用。
    實驗材料

    血清

    儀器、耗材

    試管

    實驗步驟

    一、交叉配血試驗

    1、取試管2支,標主次側.主側管加病人血清(血漿)2滴,加供血者3一

    5%紅細胞懸液(洗滌或不洗滌均可)1滴,次側反之.

    2、各加LIM0.7ml,混合均勻后,再各加Polybrene溶液 2滴,并混合均勻.

    3、用血庫專用離心機1000g離心力,離心1O秒,(若用普通離心機,離心條件為:3400rpm離心1O秒)然后把上清液倒掉,不要瀝干讓管底殘留約0.1ml液體.

    4、輕輕搖動試管,目測紅細胞有無凝集,如無凝集則必須重作.

    5、最后加入Resuspending2滴.輕輕轉動試管混合并同時觀察結果.如果在30s內凝集散開,代表是由Polybrene引起的非特異性聚焦,配血結果相合,如凝集不散開,則為紅細胞抗原抗體結合的特異性反應,配血結果不相合,如反應可凝,可進一步倒在玻片上用顯微鏡觀察.

    二、血型測定

    1、取試管并標記,加入己知診斷血清2滴,再加待檢者3-5%紅細胞懸液(洗滌不洗滌均可)l滴.

    2、加LIMO.7ml混合均勻后,再加Polybrene2滴,并混合均勻·

    3、用BaSO血庫專用離心機1000g離心力,離心10秒(若用普通離心機其離心條件為:3400rpm離心10秒)然后把上清液倒掉,不要瀝干.讓管底殘留約 0.1ml液體.

    4、輕輕搖動試管.目測紅細胞有無凝集,如無凝集則必須重作.

    5、最后加入Resuspending2滴,輕輕轉動試管混合并觀察結果,如凝集散    開,結果為陰性,如凝集不散開結果為陽性.

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    注意事項

    1、可以用含EDTA之血漿代替血清使用.

    2、若病人血清(血漿)含肝素,如洗腎患者,須多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。

    3、本試劑盒的操作方法也適用于抗體鑒定.

    4、試劑使用前請回復室溫再進行操作。

    5、加做輔助性抗球蛋白試驗,目的是增加檢測抗一K的敏感性,對檢測其   他紅細胞抗體無幫助.

    6、在冬天氣溫極底的情況下,操作交叉配血試驗某些病人血清中可能含有    寒冷凝集素等因素,而導致假陽性的結果出現,若有此懷疑,建議在最后滴入Resuspending時試管立即置入37℃水浴時,輕輕轉動試管混合,并在30秒      內觀察結果.

    7、BaSO血庫專用離心1000g離心力相當于3000γpm上文所指的普通離心機離一般為80型離心機,其相當離心力所對應轉速為3400γpm.

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