聚合酶的進化，為特殊需求量身定制生物酶

　　分析測試百科網訊 近日，Roche旗下Kapa Biosystems開發出了“直接進化ZL技術平臺”（directed evolution technology platform）。這個平臺運用遺傳，基因工程，生物信息學等分子水平上的技術，基因經過多輪的突變，篩選和擴增，獲得高品質的生物酶，而且還可以為特殊需求量身定制生物酶。

　　DNA 聚合酶作為聚合酶鏈式反應（PCR）的核心因素，在PCR中扮演中至關重要的作用，從某種意義來講PCR技術就是耐熱聚合酶的技術。生物醫藥領域所使用的大部分是野生型的DNA 聚合酶，如大家熟悉的Taq DNA聚合酶、pfu DNA聚合酶等天然形式存在的酶。因為酶分子自身的結構和功能都有限制，隨著研究人員實驗要求的提升和生物樣本復雜性的提高，野生型DNA聚合酶的局限性也逐漸凸顯出來，如擴增效率低，特異性差，高AT 或GC 含量樣本擴增結果差，樣本中或PCR 系統中有些抑制劑對反應有干擾等等。

圖1：Kapa“直接進化“技術流程

　　KAPA 2G FAST DNA聚合酶，便是KAPA 通過“直接進化”技術生產的第二代工程酶之一，其兼具了擴增速度和靈敏度，以其為核心成分的KAPA2G Fast Multiplex Mix/KAPA SYBR/Probe FAST Universal mix，延伸時間縮短至1 sec/kb，實驗時間縮短55%，且靈敏度更高，合成力更強，可兼容廣泛的GC含量和產物長度。

圖2 Kapa 2G Fast DNA Polymerase擴增速度1 Kb/sec，較野生型熱啟動酶擴增時間減少55%

圖3 針對高/ 低GC 含量的模板，KAPA SYBR/probe FAST Universal master 相比競爭產品， 擴增效率更高， 線性更好

　　Kapa 2G Robust DNA聚合酶，更強的合成能力，用于解決廣泛擴增子類型（富含GC或AT）的不一致擴增問題，并提高了對一般抑制劑的耐受性，適合于挑戰性PCR應用和困難樣本的擴增，顯著降低使用多種酶和擴增方案的優化難度，靈敏度更高。

圖4 對于富含GC 或AT 的靶標DNA，KAPA2G Robust DNA 聚合酶可以增加PCR 成功率

　　Kapa Long Range DNA聚合酶，結合了Taq DNA 聚合酶和古生菌(B-family) DNA聚合酶的優勢，通過定向改造，擁有高保真的特性，可以擴增長達15Kb的DNA片段，適用于超長序列的擴增，同時具有高靈敏度、高產量的優勢。

　　Roche Kapa Biosystems通過“直接進化”技術，定向改造了種類十分豐富的適用于多種不同實驗目的的生物酶，滿足不同的客戶需求，各有特點。