摘要:
目的 探討血清乙型肝炎病毒（HBV）基因型及HBV外膜大蛋白（LHBs）水平與肝細胞癌的關系.
方法 對61例肝癌、65例慢性活動性乙型肝炎患者及10例HBV攜帶者的血清HBV基因型、HBV LHBs進行檢測.
結果 136例中,B基因型56例（41.0%）,C基因型76例（55.9%）,B、C混合型1例（0.7%）,B、D混合型3例（2.2%）;隨病情加重,C基因型比例增加;不同基因型HBV感染的肝癌患者間HBV DNA、HBV LHBs水平存在明顯差異;慢性活動性肝炎患者二者無統計學差異.
結論 本地區HBV以B、C基因型為主,不同基因型HBV感染在肝癌的發生中可能存在不同機制.
關 鍵 詞:肝腫瘤；肝炎病毒，乙型；基因型；外膜大蛋白
C lin ica l significance of HBV ge no types and large envelope prote in quantitative defection in hepatocellular carcinoma
WANG Yong-zhong, WU Guo-xiang, QIN You-lai, XU Jian-lan, CHEN Min, PU Xiang-ke （The Third People＇s Hospital of Changzhou, Changzhou 213001, P. R. China ）
Abstract:[Objective] To explore the relation between HBV genotypes, the level of serum large envelope （LHBs） with hepatocellular carcinoma （HCC）. [Methods] HBV genotypes and HBV LHBs in sixty one HCC patients,sixty five chronic active hepatitis and ten H13V carries were detected,[Results] There were 56 （41.0%） B genotypes and 76（55.9%） C genotypes in 136 cases, only one （0. 7%） patients was found with both B and C, and three patients （2.2%） were found with B and D genotypes HBV in serum, the ratio of genotype C is in- creased with pathogenetic condition aggravation ; The level of HBV DNA and HBV LHBs in different HBV infected gene type of HCC had obvious differences; there was no significant difference in the levels of HBV DNA and HBV LHBs in chronic hepatitis B（P〉0.05）. [Conclusion] These results indicate HBV with genotype B and C exist in our area;and different HBV genotypes could have different roles in the development from hepatitis to HCC.[著者文摘]
Key words: bepatocellular carcinoma; hepatitis B virus genotype; DNA chips; large envelope protein
乙型肝炎病毒（HBV）感染可導致急、慢性病毒性肝炎，繼之發展為肝硬化及肝細胞癌。HBV可分為A至H八個基因型，文獻報道，不同年齡段肝癌患者HBV優勢基因型不同[1]。HBV外膜大蛋白（HBV L HBs）是具有雙重跨膜拓撲結構的蛋白[2]，與病毒復制密切相關。過量HBV L HBs在肝細胞內質網積聚是導致內質網應激的關鍵因素，并與肝細胞毒性甚至肝癌相關。為探討HBV基因型及HBV L HBs與肝癌的關系，2005年11月至2006年8月，我們對136例肝癌、慢性活動活肝炎、HBV攜帶者的臨床標本進行了檢測。
1 資料與方法
1.1 臨床資料 61例肝癌、65例慢性活動性肝炎患者血清標本取自本院住院患者血清資料庫，10例HBV攜帶者血清取自本院體檢人群。肝癌病例均經臨床、B超、病理檢查確診，慢性活動性肝炎和HBV攜帶者符合2000年中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯合修訂的病毒性肝炎防治方案中病毒性肝炎的診斷標準。男110例、女26例，年齡（45.83±13.49）。所有血清標本分離后凍存在 -80℃超低溫冰箱。
1.2 方法
1.2.1 HBV基因型檢測 采用中國科學院上海微系統與信息技術研究所研制的基因芯片檢測試劑盒，將待測不同HBV基因型的特征基因片段（靶基因）固定于玻片上制成檢測芯片，將從患者血清中抽提出的HBV DNA經PCR擴增標記后與芯片進行雜交，雜交信號由掃描儀掃描，再經計算機分析確認實驗結果，具體操作嚴格按說明書進行。
1.2.2 HBV LHBs檢測 HBV LHBs檢測試劑應用結構生物學和免疫學技術，篩選出針對HBV大蛋白前S區立體構象型表位的高特異性、高親和力的單克隆抗體，并在微孔條上預包被，配以辣根過氧化物酶標記抗體，TMB顯色，采用雙抗體夾心法檢測，由全自動酶聯免疫分析儀讀取并自動分析結果。
1.3 統計學方法 采用SPSS 13.0軟件進行統計分析，不同基因型間HBV DNA、LHBs含量的比較采用t檢驗。
2 結果
2.1 HBV基因型檢測結果 見表1。隨病情加重，B基因型比例逐漸降低，C基因型比例逐漸升高，B、C基因型為本地區優勢基因型。
表1 136例HBV感染者基因型檢測結果
| 臨床分型 | n | B基因型 | C基因型 | B+C混合型 | B+D混合型 | ||||
| 例 | % | 例 | % | 例 | % | 例 | % | ||
| HBV攜帶者 | 10 | 10 | 100.0 | ||||||
| 慢性活動性肝炎 | 65 | 31 | 47.7 | 32 | 49.2 | 1 | 1.5 | 1 | 1.5 |
| 肝癌 | 61 | 15 | 24.6 | 44 | 72.1 | 2 | 3.3 |
2.2 肝癌患者血清HBV DNA、L HBs檢測結果B、C基因型肝癌患者血清HBV DNA水平分別為（3.6±3.23）、（4.42±2.06）log10cop ies/ml,HBV L HBs水平分別為（57.18±60.77）、（32.77±35.68）μg/L。二者比較，C基因型血清HBV DNA水平高于B基因型（t=11.58,P＜0.05），B基因型血清HBV LHBs水平高于C基因型（t=7.94,P＜0.05）。
2.3 慢性活動性肝炎患者血清HBV DNA、L HBs檢測結果 B、C基因型慢性活動性肝炎患者血清HBV DNA水平分別為（5.89±2.40）、（6.15±1.47）log10 cop ies/ml,HBV L HBs水平分別為（130.0±84.2）、（132.8±79.3）μg/L;兩基因型比較均無統計學差異（t=2.80,0.08;P＞0.05）。
3 討論
文獻報道[1]，我國臺灣地區50歲以上肝癌和肝硬化患者HBV基因型以C型為優勢基因型，50歲以下以B型為優勢基因型，提示肝癌與基因型有關。有學者發現[3]，高水平HBV DNA患者肝癌風險增加，C基因型HBV與肝癌風險增加5倍有關，且HBV DNA和基因型之間還有加性作用。 本文結果顯示，B、C基因型為本地區HBV感染的優勢基因型，C基因型在肝癌患者中的比例明顯高于慢性活動性肝炎，且在HBV攜帶中未檢測到C基因型，提示C基因型與嚴重肝病相關，對HBV進行基因分型有助于判斷乙肝患者的預后。
本文結果顯示，C基因型肝癌患者血清HBV DNA含量明顯高于B基因，B基因型L HBs水平明顯高于C基因型；而慢性活動性肝炎患者B、C基因型HBV DNA和L HBs水平均無統計學差異。HBV是引起肝細胞癌的主要因素，目前確認HBV至少可編碼兩個轉錄激活因子，HBx蛋白和L HBs蛋白都可誘導c-Raf-1/MEK激酶級聯通路激活，其中HBx蛋白依賴Ras介導，而L HBs為PKC依賴性。HBx蛋白和L HBs均由HBV DNA編碼，這可能是高水平HBV DNA患者肝癌風險增加的原因之一。另外，HBV LHBs包括HBsAg、PreS1、PreS2蛋白，是HBV Dane顆粒和亞病毒顆粒的主要包膜成份，通常HBV DNA定量檢測的是Dane顆粒，而大蛋白定量檢測還可檢測到亞病毒顆粒，在肝癌患者中出現B基因型HBV感染者，是否與其體內蓄積大量亞病毒顆粒有關，值得進一步研究。
[參考文獻]
[1] Kao JH,Chen PJ.Hepatitis B genotypes correlate with clinical outocomes in patients with chronic hepatitis B[J].Gastroenterology,2001,120:1564-1565.
[2] Lambert C,Manns,Prange R.Assessment of determinants affecting the dual topology of hepadnaviral large envelope proteins[J].J Gen Virol,2004,85(5):1221-1225.
[3] Yu MW,Yeh SH,Chen PJ,et al.Hepatitis B virus genotype and DNA level and hepatocellular carcinoma:a prospective study in men[J].JN Cancer Inst,2005,97(4):265-272.