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  • 發布時間:2020-09-14 21:21 原文鏈接: 肝細胞原代培養操作步驟

    材料:

    小鼠

    器具:

    飯盒、紗布、小剪子、小鑷子、大鑷子、大燒杯、平皿、研磨玻片、濾網、離心管(15/50ml)、6孔培養板、吸管、移液管、手套、微量加樣器


    試劑:

    DMEM(含血清)、無血清DMEM培養基、胰酶、PBS

    準備:

    酒精擦拭臺面后把物品擺放好,開紫外線燈照30分鐘后開鼓風機吹至實驗結束。

    操作步驟:

    1、將小鼠斷頸致死,置75%酒精泡2-3秒鐘,取肝臟,置于盛有PBS的平皿中。

    2、剔除脂肪、結締組織、血液等雜物,轉移到另一個盛有PBS液的平皿中。

    3、用手術剪將臟器剪成小塊(1mm2),玻片研磨,轉到離心管,離心1000rpm,5min。

    4、視組織或細胞量加入5-6倍(3-5ml)胰酶,37℃中消化20分鐘,每隔5分鐘振蕩一次,或用吸管吹打一次,使細胞分離。

    5、加入3-5ml含血清的培養液以終止胰酶消化作用。

    6、用100目孔徑濾網濾過,除去未消化的大組織塊。

    7、1000rpm,離心5分鐘,棄上清液。

    8、加入無血清培養液5ml,沖散細胞,再離心一次,棄上清液。

    9、加入含血清的培養液l-2 ml(視細胞量),血球計數板計數。

    10、將細胞調整到5×105/ml左右,轉移至6孔培養板中,37℃下培養。


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