肥大細胞（甲苯胺藍ToluidineBlueO）染色液的操作步驟

肥大細胞(Mast cell)是疏松結締組織內常見的細胞，常成群的沿著小血管和淋巴管分布，也常見于支氣管和胰腺的小葉間導管周圍，一般細胞較大，直徑約為20-30μm，呈圓形或橢圓形，胞核較小、胞質內充滿粗大且具有異染性嗜酸性顆粒。

甲苯胺藍(Toluidine Blue O)中的陽離子有染色作用, 組織細胞的酸性物質與其中的陽離子相結合而被染色。甲苯胺藍還含有兩個助色團，能促使染料產生電離成鹽類, 幫助發色團對組織產生染色力, 使切片上的組織細胞著色，可染細胞核使之呈藍色。肥大細胞顆粒呈紫紅色，其他呈藍色。

操作步驟

取新鮮組織立即固定于10%中性福爾馬林固定液中，常規脫水包埋。

切片厚度4-5μm，常規脫蠟至水。

系列乙醇各1min，自來水洗2min。

入Toluidine Blue O Stain，浸染15～30min。

自來水稍洗。

TBO分化液分化，直至細胞核和顆粒清晰，可在顯微鏡下控制。

自來水稍洗，濾紙吸干或吹風機吹干水分。

95%乙醇1min，無水乙醇2次，每次2min。

二甲苯透明，中性樹膠封固。

 染色結果：

肥大細胞顆粒 紫藍色

背景 淡藍色

注意事項：

針對于胃粘膜組織、軟骨組織等較難著色組織的染色，浸染于甲苯胺藍染色液的時間應相應延長。

應注意組織要新鮮，取出后立即固定。

甲苯胺藍染色后不宜采用低濃度乙醇脫水，否則容易導致褪色。

分色后應快速入95%乙醇、無水乙醇、二甲苯的時間不宜過久，否則容易導致褪色。