（1）準備4排小試管，每排7支，標明記號。
（2）另取中號試管1支，加入生理鹽水3.8ml及被檢血清0.2ml（吸注液應將吸管外壁拭凈，注液時把吸管插至管底，以防過多沾于試管內壁）。
（3）用吸管將上述二者混勻（需用吸管連續吸注3次，吸時深入液面下，注時離開液面）使成1∶20的血清稀釋液。
（4）吸取上述1∶20血清稀釋液2ml，按每管0.5ml液量分別加入各排
之第1管。
（5）于上述中號試管內加入生理鹽水2ml并混勻，此種血清經2倍稀釋（由1∶20稀釋成1∶40）。
（6）再吸取此1∶40血清稀釋液2ml，按每管0.5ml液量分別加入各排之第2管。
（7）如此連續稀釋到各排第6管為止。各排的第7管只加生理鹽水0.5ml，不加血清，作為抗原對照。此時各排第1至第6管的血清稀釋度依次為1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640。
（8）將前述的四種診斷菌液分別加于1、2、3、4各排的每一試驗管及抗原對照管內，每管0.5ml。此時各排第1至第6管的血清加入等量菌液而又稀釋1倍，血清最后稀釋度已成為1∶40、……1∶1280。
（9）將所有試管搖勻后，置37℃溫箱或水浴過夜（或56℃2～4h）以促進反應，按時觀察結果。