1、取康氏試管，排成5×7形式，5 排分別編成O，H，A，B，C。
2、另取大試管一支，加入病人血清0.25ml，用4.75ml生理鹽水作1:20稀釋，取2.5ml該稀釋血清于每排第一管內分別注入0.5ml。
3、再取2.5ml生理鹽水把大試管內血清作2 倍稀釋，取2.5ml該稀釋血清于每排第二管內分別注入0.5ml，以此類推，每排最后一管加0.5ml生理鹽水作陰性對照，各稀釋度：1/20，1/40，1/80，1/160，1/320。然后于前六管中逐管加入1:10稀釋的各菌液0.5ml，各終稀釋度：1/40，1/80，1/160，1/320，1/640。
4、充分振蕩混勻，于37℃放置16-20小時判定結果。