膽汁溶菌試驗是根據下述原理進行的，膽汁或膽鹽可溶解肺炎鏈球菌，可能是由于膽汁降低細胞膜表面的張力，使細胞膜破損或使菌體裂解；或者是由于膽汁加速了肺炎鏈球菌本身自溶過程，促使細菌發生自溶。試劑：10%去氧膽酸鈉或純牛膽汁。
膽汁溶菌試驗呈陰性。
平板法以“菌落消失”判為陽性；試管法以"加膽鹽的培養物變透明，而對照管仍“混濁”判為陽性。不出現陽性反應則為陰性反應。
