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  • 發布時間:2019-04-07 14:39 原文鏈接: 胰島素測定實驗——放射免疫測定

    放射免疫測定胰島素可以用于:(1)以放射性同位素作為示蹤物進行免疫標記檢測技術;(2)用同位素標記的抗原和樣品中待測的未標記抗原與固定量的特異性抗體競爭結合,或進行競爭性一致反應,以判定待測抗原含量。

    實驗方法原理胰島素的分子量5700,由兩條氨基酸肽鏈組成。A鏈有21個 氨基酸,B鏈有30個氨基酸。A-B鏈之間有兩處二硫鍵相連。胰島B細胞中儲備胰島素約200U,每天分泌約40U。空腹時,血漿胰島素濃度是5~15μU/mL。進餐后血漿胰島素水平可增加5~10倍。胰島素的生物合成速度受血漿葡萄糖濃度的影響,當血糖濃度升高時,B細胞中胰島素原含量增加,胰島素合成加速。胰島素是與C肽以相等分子分泌進入血液的。
    實驗材料

    胰島素標準品125 I-胰島素

    試劑、試劑盒

    抗血清第二抗體PBS正常兔血清

    儀器、耗材

    計數儀試管加樣器離心機

    實驗步驟


    1.  按表進行。


    2.  測定和計算反應完畢后,將各管于室溫3 000 r/ min離心30min,仔細吸取上清液,收集于放射性廢液貯存容器內。用-計數儀分別測量各管沉淀物(B)的放射性強度(cpm),以兩管的cpm均值表示。再以第1,2管的cpm值為Bo,分別計算結合率(B%,即B/Bo×100%),用B%為縱坐標,不同濃度胰島素標準品為橫坐標,繪制標準曲線。然后根據待檢管的B%,從標準曲線中即可查得胰島素的相應含量。

    展開 
    注意事項

    臨床上使用胰島素治療的病人,血清中存在胰島素抗體,影響放射免疫方法測定血胰島素水平,在這種情況下可通過測定血漿C肽水平,來了解內源性胰島素分泌狀態。

    其他

    1.空腹時正常值為5~15mU/L,胰島素依賴型則低于正常的下限或測不出,非胰島素依賴型在正常范圍或高于正常人。
    2.胰島素釋放試驗:胰島素依賴型無高峰出現,呈低平曲線;非胰島素依賴型高峰較正常為低,或高峰延遲。 


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