制法要求
本品應從檢疫合格豬的冰凍胰臟中提取。生產過程應符合現行版《藥品生產質量管理規范》的要求。本品為動物來源,工藝中應進行病毒的安全性控制
性狀
本品為白色或類白色的結晶性粉末。本品在水、乙醇中幾乎不溶;在無機酸或氫氧化鈉溶液中易溶。
鑒別
(1)在含量測定項下記錄的色譜圖中,供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。(2)照高效液相色譜法(通則0512)試驗供試品溶液取本品適量,加0.1%三氟醋酸溶液溶解并稀釋制成每1ml中含10mg的溶液,取20l,加0.2mol/L三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液(pH7.3)20μ、0.1%V8酶溶液201與水140l,混勻,置37℃水浴中2小時后,加磷酸3l對照品溶液取胰島素對照品適量,加0.1%三氟醋酸溶液溶解并稀釋制成每1ml中含1mg的溶液,取20l,加0.2mol/L三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液(pH7.3)20μd、0.1%VB酶溶液20l與水140l,混勻,置37℃水浴中2小時后,加磷酸3dl色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(5~10μm);以0.2mol/L硫酸鹽緩沖液(取無水硫酸鈉28.4g,加水溶解后,加磷酸2.7ml,乙醇胺調節pH值至2.3,加水至1000ml)-乙腈(90:10)為流動相A,以乙腈-水(50:50)為流動相B,按下表進行梯度洗脫;柱溫為40℃;檢測波長為214nm;進樣體積25μl時間(分鐘)流動相A(%)流動相B(%)測定法精密量取供試品溶液與對照品溶液,分別注人液相色譜儀,記錄色譜圖。結果判定供試品溶液的肽圖譜應與對照品溶液的肽圖譜一致
檢查
相關蛋白質照高效液相色譜法(通則0512)測定。臨用新制,置10℃以下保存。供試品溶液取本品適量,加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1m中約含3.5mg的溶液系統適用性溶液見含量測定項下色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(5~10μm);以0.2mol/L硫酸鹽緩沖液(取無水硫酸鈉28.4g,加水溶解后,加磷酸2.7ml,乙醇胺調節pH值至2.3,加水至000ml)-乙腈(82:18)為流動相A,以乙腈-水(50:50)為流動相B,按下表進行梯度洗脫;柱溫為40℃;檢測波長為214nm;進樣體積20pl時間(分鐘)流動相A(%)動相B(%)33673系統適用性要求調節流動相比例使胰島素峰的保留時間約為25分鐘。其他要求見含量測定項下。測定法精密量取供試品溶液,注入液相色譜儀,記錄色譜圖限度按峰面積歸一化法計算,A21脫氨胰島素不得大于5.0%,其他相關蛋白質總和不得大于5.0%。高分子蛋白質照分子排阻色譜法(通則0514)測定供試品溶液取本品適量,加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1ml中約含4mg的溶液。系統適用性溶液取胰島素單體-二聚體對照品(或取胰島素適量,置60℃放置過夜),加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1ml中約含4mg的溶液色譜條件以親水改性硅膠為填充劑(3~10m);以冰醋酸-乙腈0.1%精氨酸溶液(15:20:65)為流動相;流速為每分鐘0.5ml;檢測波長為276nm;進樣體積100l系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖中,胰島素單體峰與二聚體峰的分離度應符合要求測定法精密量取供試品溶液,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。限度除去保留時間大于胰島素峰的其他峰面積,按峰面積歸一化法計算,保留時間小于胰島素峰的所有峰面積之和不得大于1.0%。干燥失重取本品約0.20g,精密稱定,在105℃干燥至恒重,減失重量不得過10.0%(通則0831)鋅照原子吸收分光光度法(通則0406第一法)測定。供試品溶液取本品適量,精密稱定,加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液。對照品溶液精密量取鋅單元素標準溶液(每1m中含10004g)適量,用0.01mo/L鹽酸溶液分別定量稀釋制成每1ml中含鋅0.20g、0.40g、0.60g、0.80g、1.0g與1.2g的溶液測定法精密量取對照品溶液和供試品溶液,在213.9nm的波長處測定吸光度,按標準曲線法計算。限度按干燥品計算,含鋅量不得過1.0%細菌內毒素取本品,加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并用檢查用水稀釋制成每1ml中含5mg的溶液,依法檢查(通則1143),每1mg胰島素中含內毒素的量應小于10EU微生物限度取本品0.3g,照非無菌產品微生物限度檢查:微生物計數法(通則1105)檢查,1g供試品中需氧菌總數不得過300cfu。生物活性取本品適量,照胰島素生物測定法(通則211)試驗,實驗時每組的實驗動物數可減半,實驗采用隨機設計,照生物檢定統計法(通則1431)中量反應平行線測定隨機設計法計算效價,每1mg的效價不得少于15單位。
含量測定
照高效液相色譜法(通則0512)測定。臨用新制,或2~4℃保存,48小時內使用供試品溶液取本品適量,精密稱定,加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含40單位的溶液。對照品溶液取胰島素對照品適量,精密稱定,加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1m中約含40單位的溶液系統適用性溶液取胰島素對照品,加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1m中約含40單位的溶液,室溫放置至少24小時色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(5~10pμm)以0.2mol/L硫酸鹽緩沖液(取無水硫酸鈉28.4g,加水溶解后,加磷酸2.7ml,乙醇胺調節pH值至2.3,加水至1000m)-乙腈(74:26)為流動相;柱溫為40℃;檢測波長為214nm進樣體積20l系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖中,胰島素峰與A21脫氨胰島素峰(與胰島素峰的相對保留時間約為1.2)之間的分離度應不小于1.8,拖尾因子應不大于1.8。測定法精密量取供試品溶液與對照品溶液,分別注人液相色譜儀,記錄色譜圖。按外標法以胰島素峰面積與A2l脫氨胰島素峰面積之和計算
類別
降血糖藥。
貯藏
遮光,密閉,在-15℃以下保存。
制劑
(1)胰島素注射液(2)精蛋白鋅胰島素注射液(3)精蛋白鋅胰島素注射液(30R)