1. 加樣前。做一次模擬加樣，進行整個程序的洗脫，測 OD 初始值。記錄所有實驗變量：加樣量、溶劑梯度、流速、吸收范圍等。
2. 制備 32P 標記的胰蛋白酶切樣品（需要幾千 cpm 才能有效地檢測到 32P 標記的多肽 )。用 0.1% TFA 懸浮樣品，10000 g 離心 5 分鐘使溶液澄清。如果多肽樣品難以溶解，可以加入溶于 0.1% TFA 的 5 mol/L 尿素或鹽酸胍。離心使溶液澄清，于加樣前加 10 倍的 0.1% TFA，混合，立即加樣開始層析。
3. 通過內徑為 0.1 mm 的 50 cm 管將分步收集裝置連到流出槽的出口，以 1 分鐘為單位收集樣品。
4. 通過測定 214 nm 處的光吸收監測多肽的洗脫。未標記多肽要在 214 nm 被檢測到至少需要 10 pmol/L。
5. 鑒定含有 32P 標記的多肽的組分。 展 | 