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  • 發布時間:2019-12-04 10:18 原文鏈接: 胰蛋白酶抑制劑(TI)酶聯免疫分析(ELISA)操作步驟

    胰蛋白酶抑制劑(TI)酶聯免疫分析(ELISA)操作步驟:

    1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10 孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為120 IU/L,80 IU/L,40 IU/L,20IU/L ,10IU/L)。

    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

    4. 配液:將30(48T 的20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T 的20 倍)倍稀釋后備用。

    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復5 次,拍干。

    6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

    7. 溫育:操作同3。

    8. 洗滌:操作同5。

    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘。

    10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
    液后15 分鐘以內進行。

    注意事項:

    1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

    4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6. 底物請避光保存。

    7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

    8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9. 本試劑不同批號組分不得混用。

    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

    計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

    胰蛋白酶抑制劑(TI)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒性能:

    1. 樣品線性回歸與預期濃度相關系數R 值為0.95 以上。

    2.批內與批見應分別小于9%和11%。

    檢測范圍:

    5 IU/L -150 IU/L

    保存條件及有效期:

    1. 試劑盒保存:2-8℃。

    2.有效期:6 個月



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