膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎表面抗原的評價

【 摘要 】　目的　對4種膠體金免疫層析測定(GICA)試條檢測乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的性能、結果等技術參數進行評價，為各實驗室的選用提供參考。方法　采用GICA法和酶免疫(EIA)法對定值的HBsAg樣品和2 158份全血或血清標本同時測定，并結合有關物理現象作觀察，對4種GICA試條的敏感性、特異性、試條滲透性、固相膜均勻性等結果進行評價。結果　4種GICA試條對HBsAg的最小檢出量為1～5 ng/ml；與EIA法比較，檢出率為95.6%～98.7%，一般不出現假陽性，未發現前帶反應；檢測所需時間5～30分鐘，但試劑成本為EIA法的4～5倍。結論　GICA適用于急診檢驗，便于獻血員現場采血前的篩選；其敏感性低于EIA法，成本高；單獨用于獻血員篩選并不可靠，必須與EIA法并用，實行雙檢。

【 關鍵詞 】　免疫酶技術　　肝炎表面抗原，乙型　　膠體金

Gold immunochromatography for HBsAg detection
ZENG Zhangxin, LIU Wenxing, ZHU Zhongyong, et al.
PLA Center for Laboratory Medicine, Fuzhou General Hospital, Fuzhou 350025

【 Abstract 】　 Objectives To evaluate the quality and performance of 4 sources of gold immunochromatography assay (GICA) strips for HBsAg detection and to provide data for various laboratories in the selection of HBsAg assay methods. Methods Several known sera and 2158 unknown sera were tested with both GICA strips and EIA. The sensitivity, specificity and physical properties of the strips were assessed. Results The minimal detection limits of the 4 sources of GICA strips were 1-5 ng/ml, with detection rates varying from 95.6 to 98.7%, as compared with EIA. No false positives and pre-band phenomena were found. GICA needed 5 to 30 min to complete. It costed 4 or 5 times as much as EIA. Conclusions GICA is fit for emergency and rapid screening of blood donors. It is less sensitive than EIA, and costs more. In blood donor screening, GICA should be combined with EIA, since screening only by GICA may not be reliable.

【 Key words 】　 Immunoenzymetechniques Hepatitis B surface antigens Gold colloid

　　膠體金免疫層析測定(簡稱GICA)具有簡便、快速、特異性高、試劑穩定的優點，已在臨床免疫檢驗中廣泛應用 ［1，2］ 。目前越來越多的實驗室采用GICA試條測定乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)。由于各廠家采用的固相微孔膜、包被和金標記抗體以及成品試條制備工藝有所不同，以致各種GICA試條對HBsAg檢測性能和結果出現差異。 我們就已在國內使用的4種品牌8個批號的GICA試條對HBsAg檢測性能及有關技術參數進行了試驗比較和評價。

材料和方法

一、材料

1、檢測HBsAg的GICA試條：
　　4種品牌、8個批號，分別稱為試條1(批號P006和6926，規格5.5 mm)；試條2(批號980908，規格3.3 mm)；試條3(批號9811059和98120711，規格3.3 mm)；試條4(批號8092801、8122901和9022001，規格3.3 mm)。

2、測定HBsAg的EIA試劑盒：
　　 共4種，分別為上海實業科華生物技術有限公司，廈門新創科技有限公司，上海榮盛生物技術有限公司和深圳華元醫藥生物工程公司產品。

3、HBsAg定值質控樣品：購于北京全國臨床檢驗中心(批號9901，分別為1、2、5 ng/ml)。

4、酶標儀：美國Bio-Rad450型。

5、標本來源：采集無償獻血者和來本院就診患者的末梢全血1 190份、血清968份。

二、方法

1、敏感性試驗：
　　對定值為1 ng、2 ng、5 ng/ml的3種HBsAg質控樣品和2 158份受檢全血或血清標本，采用4種GICA試條和4種酶免疫(EIA)試劑盒同時測定。GICA法測定血清HBsAg是將各試條的加樣區直接浸入血清中30秒，取出后平放靜置。全血HBsAg測定則采用受檢者末梢全血3滴直接滴加于每一試條加樣區，待滲透約1分鐘后，插入含0.3 ml生理鹽水的小試管中靜置。兩種測定均在30分鐘內間斷觀察并記錄A值。定值樣品測定與血清HBsAg測定相同。

2、特異性試驗：
　　 收集80份經EIA測定HBsAg為陰性的血清標本，分別從4種GICA試條中各任意抽取20條進行復檢。另收集6份EIA初始測定HBsAg出現前帶反應(實際為抗原過量而呈弱陽性，A值0.216～0.328)，但GICA測定為強陽性的血清標本，經稀釋后再用EIA復檢，以此2種試驗觀察GICA測定HBsAg的特異性。

3、GICA試條的滲透速度和均一性試驗：
　　 從每一種品牌的不同批號中任意抽取10條GICA試條，分別浸入同一份混合血清中，以試條加樣區接觸血清開始計時，30秒后取出，平放靜置觀察，待血清滲透至對照線出現肉眼可見顏色時，記錄時間，并以各自10條的平均時間作為滲透速度的指標。均一性觀察是在測定受檢標本時，連帶觀察100條每一品牌或不同批號GICA試條，以標本在濾膜上滲透時出現明顯的未浸濕的斑塊，或浸液后15分鐘以上不能到達對照線的試條判為不均一，計算各自百分率作為試條的均一性指標。

4、其他相關性試驗與觀察：
(1)對GICA試條用于全血與血清標本測定HBsAg的敏感性做比較試驗；
(2)觀察試條保存條件對測定結果的影響；
(3)對GICA和EIA測定HBsAg時，每份所需試劑成本和檢測時間分別進行測算并比較。

結果

1、采用4種GICA試條和4種EIA試劑盒，對3種HBsAg定值的質控品和2 158份受檢血標本測定HBsAg的結果見表1，2。

2、EIA法測定80份HBsAg陰性的血清標本，經4種GICA復檢結果均為陰性。6份EIA初始測定HBsAg出現前帶反應呈弱陽性的血清標本(A值0.216～0.382)，經稀釋后重測均為強陽性(A值1.169～>2.500)，其中1份作倍比稀釋最高至1∶25 600，其A值為0.240，與定值樣品比較，推算該份

表1 　4種GICA和EIA對HBsAg定值樣品測定結果的比較

*為定性試驗結果陰性，其余為陽性

表2 　GICA檢測全血或血清HBsAg陰性標本經EIA復檢的結果比較

血清HBsAg濃度約為51 200 ng/ml，而GICA測定都顯強陽性。

3、GICA試條的滲透速度和均一性試驗結果見表3。

表3 　4種GICA試條滲透速度與均一性試驗結果比較

4、用GICA試條4測定1 139份獻血員的全血HBsAg陰性標本，采血后收集血清經EIA全部復檢，檢出的47份陽性血清，再用同批號GICA試條重新測定，檢出陽性6份。另外試驗觀察到密封包裝開封后的試條在4℃存放時，由于受潮，在使用此種試條檢測時，對照線和陽性反應色帶均變弱，甚至不出現，使測定敏感度下降或失效。

5、經測算GICA試條每份成本費為4.0～6.2元，測定用時間5～30分鐘；每份EIA試劑的成本費1.0～1.2元，測定所需時間1.5～2小時。

討論

　　GICA檢測HBsAg具有簡便、快速、可單份操作的優點 ［2，3］ ，能滿足就診者急診檢驗的需要，尤其為無償獻血者現場采血前檢測HBsAg提供了便利條件。因此，許多實驗室采用GICA法測定HBsAg的興趣與需求不斷增加。目前，國內一些試劑廠商紛紛推出或代理國內外商品化的GICA試條，但各生產廠家制備試條的固相微孔膜、包被方法和金標記用抗體以及工藝技術上存在差異，使HBsAg的測定結果受到一定影響。就此，我們選用國內代理商的4種GICA先后8個批號試條對測定HBsAg的性能、結果等技術性參數作了比較及評價，為實驗室的選用提供參考。

　　選擇了3種低定值的HBsAg質控樣品和2 158份待檢測HBsAg的全血或血清標本，先后采用4種GICA試條和4種EIA試劑盒對每份樣本經2種方法同時測定并比較。GICA對HBsAg的最小檢出量是1～5 ng/ml，EIA的最小檢出量均≤1 ng/ml(表2)；GICA對HBsAg的檢出率為EIA的95.6%～98.7%，平均為96.2%(表2)。結果表明GICA法的敏感性低于EIA法，與文獻報道大致相同 ［2，3］ 。與EIA比較，GICA檢測HBsAg一般不出現假陽性；對抗原量過大的標本未發現前帶反應。表明GICA檢測HBsAg具有高特異性。

　　GICA檢測HBsAg雖然適用于單份標本測定和急診檢驗，對現場采血前獻血員的篩選有其實用價值，但由于測定的敏感度低于EIA法，加上其成本是EIA法的4～5倍，使GICA的應用將受到一定的限制。為了確保臨床用血的安全，經GICA初篩測定為HBsAg陰性的供血，仍需用EIA進行復檢。如時間允許，患者就診和獻血員篩選應首選EIA檢測HBsAg，可提高檢出率，并大大降低檢測費用。

　　從4種GICA試條的滲透速度和發生不均勻的比率結果可以看出，試條測定HBsAg的敏感性與兩者存在一定的相關性。對于不同品牌或同一品牌不同批號試條的敏感性、滲透速度和微孔膜不均一性的差異，可能與各廠家所用的材料和制備工藝技術有關。GICA測定全血與血清HBsAg的結果表明，血清比全血的檢出率要高，必要時可選用血清測定。另外，選用敏感性高，滲透速度快，微孔膜均一性好，且密封、干燥保存的高質量試條，可保證HBsAg檢測結果的準確性。

作者單位：350025 福州，南京軍區福州總醫院全軍檢驗中心

參考文獻

[1]　Beggs M, Novotny M, Sampedro S, et al. A self-perfoming chromatographic immunoassay for the qualitative determination of human chorionic gonadotrophic (HCG) in urine and serum. Clin Chem, 1990, 36: 1084-1085.
[2]　陶義訓. 快速斑點免疫結合試驗在醫學中的應用評估. 中華醫學檢驗雜志，1994，17： 197-199.
[3]　周繼文，戎廣亞，楊守純，等. 膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎病毒表面抗原. 中華醫學檢驗雜志，1998，21： 30-32.