膠體金免疫層析試紙條技術及缺點

　　將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，再移動至固定的抗原或抗體的區域時，待檢物與金標試劑的結合物又與之發生特異性結合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結果（膠體金紅色）。有三種反應模式：夾心法，間接法，競爭抑制法。

　　1、雙抗體夾心法（測抗原）膠體金試紙原理

　　以新型冠狀病毒為抗原，試紙上有兩種針對新型冠狀病毒的抗體存在，在試紙不同的位置上。而膠體金標記的抗體是其中一種針對抗原的抗體，在試紙的結合墊上。

　　（1）當咽拭子、鼻拭子、肺泡灌洗液的樣本滴上加樣孔之后，再滴加幾滴流動介質，當臨床樣本里面有特異性病毒抗原（Antigen）時，在結合墊處的金標抗體（比如識別冠狀病毒單抗和膠體金偶聯）會識別并結合病毒抗原，形成“新型冠狀病毒-金標抗體”復合物；

　　（2）樣品在層析作用下往前移動，當到達T線時（檢測線），T線處具有T線抗體（另一種針對新型冠狀病毒的抗體，比如多抗，和金標單抗識別的抗原表位不同，可以識別同一抗原），則會形成“T線抗體—待測抗原—膠體金偶聯抗體”復合物，所以T線處膠體金大量聚集從而顯現紅色（陽性）

　　（3）過量的金標抗體會繼續從T線處流向C線處（質控線），C線處具有專門針對金標抗體的抗體（抗-抗體），當過量的膠體金顆粒到達C線后，C線抗體就會與金標抗體結合形成“C線抗體-金標抗體”復合物，大量積聚后顯紅色。C線抗體識別金標抗體的能力極強，所以質控線一定會顯紅色，如果這條線沒有顯色，那么這次檢測結果是無效的。

　　2、間接法（測抗體）膠體金試紙原理

　　還是以新型冠狀病毒為例，不過相較前面咽拭子、肺泡灌洗液的樣本，此處需要的是血液（血清）樣本。劃重點當病原侵入機體最早產生的抗體是IgM（IgM大約一周后產生，知識點隨便翻一本免疫學的書）。所以機體會產生針對新型冠狀病毒的IgM（就叫IgM*）。

　　（1）血液（血清）樣本滴加后，結合墊處的金標抗原（比對金標新型冠狀病毒某體外重組蛋白），形成“IgM*-金標抗原”復合物；

　　（2）在T線處具有抗IgM抗體，當“IgM*-金標抗原”到達后，形成“抗IgM抗體-IgM*-金標抗原”復合物，大量聚集顯紅色；

　　（3）在C線處具有針對金標抗原的抗體（抗金標抗原抗體），不管樣本里面有沒有IgM*，過量的金標抗原會到達C線處，與抗金標抗原抗體結合，形成“抗金標抗原抗體-金標抗原”復合物顯紅色。

　　3、競爭法（小分子物質檢測）膠體金試紙原理

　　小分子抗原或半抗原（比如小分子激素或藥物）缺乏可作夾心法的兩個以上位點，因此不能采用雙抗體夾心法，可以采用競爭法模式。樣本中的一定量的小分子抗原和固相抗原競爭結合金標抗體，樣本中抗原量越多，結合在固相上的標記抗體就會越少，最后顯色的也會越淺。為方便大家理解，我們以脂多糖(（LPS）)為例。

　　（1）若樣品中有LPS，則LPS和金標抗體結合，形成“LPS-金標抗體”復合物。T線處為LPS-BSA偶聯物（LPS通過與BSA等大分子物質偶聯從而能夠固定于NC膜），金標抗體由于被樣品中的LPS優先結合，從而在T線處與不能與BSA偶聯并固定的LPS結合，故T線處結合反應被抑制，無顯色反應；而“LPS-金標抗體”復合物繼續向后泳動，在C線處（含抗金標抗體）結合形成“LPS-金標抗體-抗金標抗體”復合物顯紅色（T線無色，C線紅色）。

　　（2）若樣品中沒有LPS，則金標抗體隨無LPS樣品液體流動至T線處時，與通過BSA固定在NC膜上的LPS結合，形成“金標抗體-LPS-BSA”，從而出現紅色顯色反應；而過剩的“金標抗體”繼續向后泳動，在C線處（含抗金標抗體）結合形成“金標抗體-抗金標抗體”復合物顯紅色（T線紅色，C線紅色）。

　　4、膠體金法優缺點

　　膠體金的最大優點就是快速，方便。但是缺點也很明顯—通量不高而且試紙的準確性高度依賴于抗體的特異性（抗體特異性不好容易有交叉反應）。