ELISA法在臨床實驗室已得到普遍的應用,特別是用于各型肝炎標志物的檢測。但ELISA法由于操作程序復雜,時間較長,需要洗板機、酶標檢測儀等貴重儀器。給實驗室帶來不便。ELISA法需時較長的主要原因,是由于液相中的抗原(或抗體)需經擴散才能與固相上的抗原或抗體反應,不適當地縮短反應時間,將使靈敏度降至臨床要求以下。為滿足臨床快速檢測的需要,近年來發展了多種簡便、快速的免疫學檢測方法,快速斑點滲濾法即為其中一種,其標記物質用膠體金即稱為快速斑點免疫金滲濾法(Dot-im2munogoldfiltrationassay),又稱滴金免疫法。
快速斑點滲濾法的基本原理仍是間接法或夾心法。間接法測抗體:固定于膜上的特異性抗原+標本中的相應抗體+金標記的抗體或SPA顯色(將某一檢疫傳染病標準抗原固定于NC膜上制成檢測試紙,取一滴待檢樣品滴加到膜上,再滴加金標記的抗抗體)。
夾心法測抗原:固定于膜上的多克隆抗體+標本中待測抗原+金標記的特異性單克隆抗體顯色(制備某一檢疫傳染病的多克隆抗體,固定于NC膜上制成檢測試紙,取一滴待檢樣品滴加到膜上,再滴加金標記的單克隆抗體)。
可根據需要設置不同的檢測閱讀模式,比如雙點模式,如圖2。也可以設計成加減號模式。如圖3。若需要同時檢測多個項目,也可以設計成多項目檢測模式。如圖4所示的雙項目模式。
快速斑點免疫金滲濾法檢測速度快,結果觀察一目了然,已應用于多種臨床檢測項目。在大宗動物的出入境檢疫和疾病普查中尤其能體現其優越性,不用熒光掃描儀等昂貴的設備,不需復雜的操作,不受實驗條件的限制,在操作完成后即可直接觀察結果,大大縮短檢測時間和勞動強度。
實驗結果表明,膠體金的敏感性可達到ELISA的水平。利用金顆粒可催化銀離子還原成金屬銀這一原理,采用銀顯影劑增強金顆粒的可見性,更可大大提高測定靈敏度,檢測下限可低至0.1ng。膠體金免疫印跡技術如此簡便、快速,且有相當高的靈敏度,在檢驗檢疫上必有很大的應用潛力。