脂肪酸的β氧化

一、實驗目的 
（1）了解脂肪酸的β-氧化；

（2）通過測定和計算反應液內丁酸氧化生成丙酮的量，掌握測定β-氧化的方法及原理。

二、實驗原理

根據β—氧化學說，機體組織能將脂肪酸氧化生成乙酰輔酶A。兩分子乙酰輔酶A可再縮合成乙酰乙酸。在肝臟內，乙酰乙酸可脫羧生成丙酮，也可還原生成β-羥丁酸。乙酰乙酸、β-羥丁酸和丙酮總稱為酮體。酮體為機體代謝的中間產物。在正常情況下，其產量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食時，血中酮體含量增高，尿中也能出現酮體。

本實驗用新鮮肝糜與丁酸保溫，生成的丙酮可用碘仿反應測定。在堿性的條件下，丙酮與碘生成碘仿。反應式如下：

2NaOH+I₂→NaIO+NaI+H₂O

CH₃COCH₃+3NaOI→CHI₃+CH₃COONa+2NaOH

                            碘仿               

剩余的碘，可用標準硫代硫酸鈉滴定。

NaOI+NaI+2HCl→I₂+2NaCI+H₂O   I₂+2Na₂S₂O₃→Na₂S₄O₆+2NaI

根據滴定樣品與滴定對照所消耗的硫代硫酸鈉之差，可以計算由丁酸氧化生成丙酮的量。

三、試劑與器材 
恒溫水浴、微量滴定裝置、解剖用具、玻璃器皿等。

Locke氏溶液、0.1mol/L碘溶液、pH7.6,mol/L的磷酸緩沖液、

0.2mol/L丁酸溶液、15%三氯乙酸溶液、10%氫氧化鈉溶液、10%鹽酸溶液。

四、操作方法 
處死動物→制備肝糜→丁酸氧化反應→碘仿反應→碘滴定

五、關鍵步驟與注意事項

① 用新鮮肝糜進行實驗，確保肝內酶活力。

② 注意滴定終點的控制，保證實驗的準確度。