實驗方法原理
酰基 CoA:丙二酰 CoA C-轉酰基酶(脫羧、異丁基還原、烯酰還原與硫酯水解)。
乙酰-CoA+n 丙二酰-CoA+2n NADPH+2n H+ → CH3-(CH2-CH2)n-CO-CoA+n CoA+n CO2+2n NADP++n H2O
式中,n=6~8。
實驗材料 脂肪酸合酶
試劑、試劑盒 磷酸鉀EDTA二硫赤蘚糖醇乙酰-CoA丙二酰 CoANADPHBSA
儀器、耗材 分光光度計
實驗步驟
實驗所需「試劑」具體見「其他」
0.96 ml 實驗混合物
0.02 ml 酶樣品
25℃ 時,觀察 3~4 min 于 340 nm 處吸收值降低
開始反應需加入 0.02 ml 0.007 mol/L 丙二酰-CoA 0.14 mmol/L
25℃ 時,于 340 nm 處吸收值降低,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
其他
試劑:
0.1 mol/L 磷酸鉀,pH 6.5
0.1 mol/L EDTA(Mr=292.2;292 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L 二硫赤蘚糖醇(DTE,Mr=154.2 或二硫蘇糖醇,DTT,Mr=154.2;154 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L 乙酰-CoA(Li3 鹽,Mr=827.4;8.3 mg/ml)
0.007 mol/L 丙二酰 CoA(Mr=877.3,Li4 鹽;6.1 mg/ml)
0.01 mol/L NADPH(Mr=833.4,Na4 鹽,83 mg 溶于 10 ml 水中)
2.4% BSA(240 mg 溶于 10 ml 水中)