一、檢驗項目
1.腦脊液的細菌培養、真菌培養、一般細菌涂片、真菌涂片、結核菌涂片、墨汁染色查新型隱球菌。
2.血液、骨髓的細菌培養
二、物品準備與檢驗申請
1.首選無菌穿刺包內無菌管。也可請拿檢驗申請單到細菌室登記領取無菌試管；領取標本采集的容器，拿檢驗申請單到細菌室登記領取專用血培養瓶。
2.填寫檢驗申請單。用鋼筆填寫，字跡清楚，填寫內容包括：患者姓名、性別、年齡、科別、病區、床號、住院號、臨床診斷、感染狀況、近期抗菌藥物的使用、送檢目的、申請醫生及送檢時間。
三、標本采集方法
1.采集指征
（1）腦脊液采集指征
①癥狀指征：發熱等感染性全身癥狀；顱內壓升高癥狀：頭痛、惡心、嘔吐等；腦膜刺激癥狀：頸向強直等懷疑為腦膜炎的患者；因嬰兒和新生兒的臨床表現不明確和無特異性，有時僅有不明原因發熱、抽搐或嘔吐等，疑為腦膜炎，采取腦脊液。
②疾病指征：化膿性腦膜炎；非化膿性腦膜炎。
（2）血液及骨髓采集指征
①癥狀指征：病人出現以下一種或幾種體征時應采集血培養：發熱（≥38℃）或低溫（≤36℃）；寒戰；白細胞增多（＞10×109/L,特別有“核左移”時）；血液病患者出現粒細胞減少（成熟的多形核白細胞＜1×109/L）；血小板減少⑥皮膚、黏膜出血；昏迷；多器官衰竭；血壓降低；C反應蛋白升高及呼吸加快等。
②疾病指征：化膿性病灶或損害、粘膜損傷性疾病、肝臟疾病、糖尿病、血液疾病及惡性腫瘤、艾滋病、呼吸道感染或呼吸衰竭、長期輸液或導管介入疾病、血液透析患者。
③特殊病情：1）新生兒可疑菌血癥時，除發熱或低溫外，很少培養出細菌，應增加尿液和腦脊液培養。2）老年菌血癥病人可能不發熱或不低溫，如伴有身體不適、肌痛或中風，可能是感染性心內膜炎，也應采取血培養。3）骨髓培養與血液培養的送檢指征是基本一致的，臨床常規血液感染有指征時以抽取血培養為主。但當骨髓炎時或長期使用抗菌藥物患者，抽取骨髓培養陽性率高于血培養。4）各種無菌體液標本，如胸腹水、漿膜腔積液及各種穿刺液等（特別是當液體清亮時）亦可注入血培養瓶以提高培養的陽性率。
2.采集方法
（1）腦脊液標本由臨床醫師以無菌手續穿刺抽取，將標本裝入無菌試管，立即送檢。
（2）血液和骨髓標本采集要嚴格按照皮膚消毒、培養瓶消毒、靜脈穿刺和培養瓶接種的程序來操作。
①嚴格的皮膚消毒三步法：1）75%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30s以上；2）用1～2％碘酊作用30s或10%碘伏作用90s以上，從穿刺點向外畫圈消毒，至消毒區域直徑3cm以上；3）75％酒精脫碘。對碘過敏的病人只能用75%酒精消毒，消毒60s，待穿刺部位酒精揮發干燥后穿刺采血。
② 培養瓶消毒程序：1）用75％酒精（不能用碘酒）消毒血培養瓶橡皮塞子；2）酒精作用60s以上；3）在血液注入血培養瓶之前，用無菌紗布或棉簽清除橡皮塞子表面殘余酒精，然后注入血液。
③靜脈穿刺和培養瓶接種程序：1）在穿刺前或穿刺期間，為防止靜脈滑動，可戴乳膠手套固定靜脈，不可接觸穿刺點；2）用注射器無菌穿刺取血后，直接注入血培養瓶中（勿換針頭）；3）血標本接種到培養瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固，立即送檢，切勿冷藏！需要注意的是注入血液后不需再消毒瓶塞，不要將棉球或棉簽貼在瓶口。
此外，采集血液和骨髓標本時還要注意血液和骨髓的采集量，一般成人采血量是8～10 ml,兒童采血量1～3 ml（占總血量的1%）。骨髓采集量一般為1～2 ml。
3.采集標本的注意事項
（1）采集腦脊液最好在抗菌藥物治療前采集標本；穿刺過程中要嚴格無菌操作，防止污染；采集標本須放入無菌試管中，試管中無需加防腐劑，若只采集了一管而要做不同檢查，應首先送到細菌室；做腦脊液培養的患者，建議同時做血培養。
（2）血液和骨髓采集時需要注意以下幾點：①從靜脈采血（通常采血部位為肘靜脈），不建議從動脈采血，疑是細菌性心內膜炎時，則以肘動脈或股動脈采血為宜，切忌在靜脈滴注抗菌藥物處采血。②用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭（如果行第二次穿刺，應換針頭）直接注入消毒后的血培養瓶。③多次采血應在不同部位的血管穿刺以排除皮膚菌叢污染的可能。④除非無法作靜脈穿刺取血，否則不應從靜脈植入管（靜脈導管或靜脈留置口）內取血。⑤抽血前應將標簽貼于或直接寫于血培養瓶頸上或瓶身空白處，標簽內容包括病人信息、采血時間、采血部位、采血量。注意不要把標簽貼在培養瓶條形碼上，也不要在條碼上涂寫，否則儀器無法識別。⑥如同時作需氧和厭氧培養，應先將標本接種到厭氧瓶中，然后再注入需氧瓶，嚴格防止將空氣注入厭氧瓶中。若血量不足則先滿足需氧瓶10 ml血，然后將剩余的血注入厭氧瓶內，因為真菌、銅綠假單胞菌、窄食單胞菌只在需氧瓶內生長。⑦采血后的培養瓶若不能立即送檢，可放室溫保存，但不可放入冰箱保存。未使用的血培養瓶2℃-25℃保存。
除了以上的幾點注意事項，還要注意血培養的次數和時間。堅持采血培養應該盡量在使用抗菌藥之前進行（心內膜炎除外），在24 h內采集2～3份血培養，1個需氧瓶+1個厭氧瓶為一份，（一次靜脈采血注入到多個培養瓶中應視為單份血培養）。對間歇性寒戰或發熱的患者，應在寒戰或體溫高峰到來之前0.5～1 h采集血液，或于寒戰或發熱后1～12 h內采集，因為發熱時血液中可能沒有細菌。在采集血培養后的2-5 天內不需要再重復采血培養（除外心內膜炎和導管相關性敗血癥），因為進行治療后的2-5 天血液中的感染細菌不會馬上消失。
對于特殊的全身性和局部感染患者采血培養時要做到以下幾點：①懷疑為急性原發性菌血癥、真菌菌血癥、急性腦膜炎、骨髓炎、關節炎、細菌性肺炎、腎盂腎炎發熱患者，應在不同部位（如兩臂）采集2～3套血標本（應在抗生素治療前完成）。②不明原因發熱，如隱性膿腫，傷寒熱和波浪熱，先在不同部位采集2～3套份血標本，間隔≥1 h。24-36 h后估計體溫升高之前（通常在下午）再采集2套血培養送檢。③懷疑為細菌性心內膜炎者，對于急性病例在抗生素使用前1～2 h內多部位采集3份血標本送檢；對于亞急性病例，在抗生素使用前1～2 h內多部位采集3份血標本（間隔≥15分鐘）送檢，若24 h后培養陰性，再采集2～3份的血標本；若入院前2周內接受抗菌藥物治療的患者，連續3天，每天采集2份血培養送檢。
四、 標本運送和驗收
（1）標本采集后應立即送檢（15分鐘內），如不能立即送檢，需室溫保存，切勿冷藏。（因為腦脊液中常見的致病菌如腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌屬苛養菌，對生長條件要求較高，可因不適應外部環境以及細菌自身產生的自溶酶導致細菌死亡而致培養結果假陰性）。
（2） 送檢地點：檢驗科細菌室或急診檢驗科
（3）標本驗收與拒收：①檢查盛裝腦脊液的容器是否為無菌管、有無滲漏、破裂或明顯污染，容器上標簽與化驗單是否相符。若容器未貼標簽或標簽與化驗單不符或容器破裂或明顯污染時，未用無菌管收集時，則拒收并聯系臨床醫師，報告拒收理由。②寒冷天氣未保溫送檢，標本送檢延遲或冷藏保存或標本量過少（＜0.5 ml），應立即聯系臨床醫師，報告標本不合格的具體理由并提示由此可能造成陰性結果，建議重留標本。③檢查血液標本是否適量，血液是否凝固。