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  • 實驗材料

    細胞懸液

    試劑、試劑盒

    DMSO

    儀器、耗材

    HL5 培養基Eppendorf 管或凍存管

    實驗步驟

    一、凍存細胞

    1. 用新鮮的 HL5 培養基收獲細胞,使其密度為 2X106 到 4X106,將等分為 1 ml 的細胞懸液加入到 1.5 ml 的 Eppendorf 管或凍存管中,置于冰上。

    2. 加入 111 μl DMSO,混勻,置于冰上。

    3. 立即將管放入 -20℃ 冰箱凍存 2 小時。

    4. 將管轉移至 -70℃ 冰箱。

    5. 儲存一周后融化一份,以證明本方法工作良好且盤基網柄菌可以被復蘇。

    二、融化細胞

    1. 向一個 60 mm 的培養皿中加入 3 ml HL5 培養基。

    2. 用一個 1 ml 的吸管,在培養皿中吸取 0.5 ml 培養基并加到凍存的管中,上下吹打以融化細胞懸液并迅速轉移到培養皿中。

    3. 第二天換培養基,細胞將在幾天內開始生長。

    三、凍存孢子

    1. 在細菌平板或饑餓平板上培養細胞,使果實體成熟 1~2 天直到它們變黃。

    2. 用一個滅菌的接種環輕觸果實體的頂部,以收集 10 個孢子頭,轉移到一個盛有 1 ml 滅菌儲存緩沖液的 Eppendorf 管中。

    3. 充分混勻孢子懸液,每等份 0.1 ml 分裝到  Eppendorf 管中。

    4. 在干冰/乙醇浴中冷凍。

    5. 儲存于 -70℃ 冰箱。

    6. 向凍存的一份孢子中加入 1 ml 饑餓緩沖液融化孢子,作系列稀釋后在細菌平板上涂液。

    展


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