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  • 發布時間:2020-05-26 10:44 原文鏈接: 腺相關病毒(AAV)技術快速入門手冊(一)

    腺相關病毒(AAV)作為一種安全、持久、高效、高特異性的基因操作工具,在生物學特別是神經生物學領域中被廣泛使用。許多新手對于AAV的使用往往是知其然而不知其所以然。這篇短文將以圖文結合的形式爭取讓大家在最短的時間內全面了解這種病毒工具。

    什么是AAV?

    野生型AAV是一種復制缺陷型微小病毒,需要腺病毒或皰疹病毒幫助其在體內復制擴增。而我們做實驗用的是不需要輔助病毒的重組AAV病毒(rAAV)。將目的基因的CDS區序列或者RNAi干擾序列插入rAAV表達質粒中,包裝病毒,然后直接使用rAAV感染細胞就能完成目的基因操作。

    什么時候用rAAV?

    當我們需要對特定基因進行過表達或干擾時,特別是做動物實驗的時候,就可以使用rAAV病毒。針對不同的實驗需求,下表可以幫助您選擇合適的病毒工具。

    rAAV的優點是什么?

    1.安全性高,目前還沒有發現AAV對人體致病;每10個人中就有8個人在一生中會感染AAV,而rAAV更是去除了96%的AAV基因組,進一步確保了安全性。目前唯一通過歐盟藥監局的基因治療藥物Glybera也是一種rAAV。

    2.免疫原性低:當AAV用局部大劑量感染肌肉、腦、眼等組織時,很少有感染上的細胞之后被免疫系統所清除。這種特性對于動物實驗上顯然極有幫助。

    3.感染譜廣:幾乎所有處于分裂期和靜止期的細胞都可以使用AAV來感染。

    4.表達時間長:rAAV可在宿主細胞中形成附加體(episome)存在于細胞核中,在細胞分裂不旺盛的組織中可持續表達5個月以上。

    5.擴散性強:rAAV具有遠高于腺病毒和慢病毒的擴散性,可以穿透血腦屏障,是最理想的神經元和膠質細胞感染工具。

    6.高穩定性:rAAV病毒可使用冰袋運輸,并且對氯仿等試劑具有抗性

    7.特異性強:rAAV有十數種常用的血清型,不同的血清型對不同的臟器有較高的識別及感染能力。


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